靶向乳腺癌細(xì)胞的他莫昔芬納米粒的制備及體外初步評價(jià).pdf

1、目的：
　　以殼聚糖（CS）為材料，合成染料木素修飾的殼聚糖衍生物（GEN-CS）；以GEN-CS為載體材料，TAM為模型藥物，三聚磷酸鈉（TPP）為交凝劑，染料木素（GEN）為靶向配基，采用離子交聯(lián)法構(gòu)建靶向乳腺癌細(xì)胞的TAM納米粒，進(jìn)一步評價(jià)納米粒的形態(tài)、粒徑、Zeta電勢、載藥量及包封率，體外釋放等；激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞對納米粒的攝取情況，采用MTT法比較載藥納米粒與游離藥物對MCF-7細(xì)胞的增殖抑制作用。
　　方

2、法：
　　利用1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺/N-羥基琥珀酰亞胺（EDC/NHS）催化反應(yīng)，將GEN與CS通過丁二酸的雙羧基進(jìn)行偶聯(lián)，得到GEN-CS載體材料，運(yùn)用紅外等技術(shù)對它的結(jié)構(gòu)進(jìn)行確證和表征。
　　GEN修飾的CS分子中未?；陌被c離子交凝劑TPP在適宜條件下形成納米粒，將TAM包載于納米粒中。用透射電子顯微鏡（TEM）觀察納米粒形態(tài)；用馬爾文ZS90粒度儀測其粒徑大小和分布、電勢；HPLC法測定納米粒

3、的載藥量和包封率；采用恒溫水浴振蕩法考察納米粒的體外釋藥。
　　制備FITC標(biāo)記的他莫昔芬殼聚糖納米粒（TAM-CS-NPs）和TAM-GEN-CS-NPs，然后分別作用于 MCF-7細(xì)胞，用激光共聚焦顯微鏡觀察 TAM-CS-NPs和TAM-GEN-CS-NPs在細(xì)胞內(nèi)的攝入與分布。
　　體外培養(yǎng) MCF-7細(xì)胞，通過 MTT法測定染料木素修飾的殼聚糖納米粒（GEN-CS-NPs）、TAM溶液、TAM-GEN-CS-NPs

4、納米粒懸液對細(xì)胞的增殖抑制率，并計(jì)算當(dāng)細(xì)胞生長抑制率為50％時(shí)的所需藥物濃度，即IC50值。
　　結(jié)果：
　　制備的GEN-CS載體材料中GEN基團(tuán)的質(zhì)量百分含量為1.16%，GEN-CS和CS紅外譜圖對比發(fā)現(xiàn)，新增的1600 cm-1、1456 cm-1為苯環(huán)的特征吸收峰，1668 cm-1為酰胺I帶，這證實(shí)CS上成功接枝GEN。
　　透射電子顯微鏡（TEM）觀察納米粒為圓形或類圓形，平均粒徑為299.8 nm， P

5、DI為0.181，Zeta電位為27.6 mV，載藥量為14.02，包封率為85.77%，與TAM相比較，TAM-GEN-CS-NPs具有明顯的緩釋性能。
　　MCF-7細(xì)胞與經(jīng)FITC標(biāo)記的TAM-CS-NPs和TAM-GEN-CS-NPs，共同孵育4 h（37℃），激光共聚焦顯微鏡觀察證明腫瘤細(xì)胞對TAM-GEN-CS-NPs的攝取明顯高于CS-NPs。
　　經(jīng)析因設(shè)計(jì)資料的方差分析，顯示藥物因素與濃度因素之間存在交互效

6、應(yīng)（F=31.04，P=0.000），即不同處理組對腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞增殖抑制率隨藥物濃度的變化而變化。GEN-CS-NPs對MCF-7細(xì)胞有輕微的增殖抑制作用，且隨著濃度的增加，抑制作用增強(qiáng)且具有顯著性差異（P<0.05）。TAM、TAM-GEN-CS-NPs對MCF-7細(xì)胞均有抑制作用，且隨著濃度的升高而增強(qiáng)；相同藥物的濃度，作用相同的時(shí)間， TAM-GEN-CS-NPs對MCF-7細(xì)胞增殖抑制作用最強(qiáng)，GEN-CS-NPs最弱，具有顯

7、著性差異（P<0.05）。TAM、TAM-GEN-CS-NPs的IC50分別為18.21μmol/L、12.82μmol/L。
　　結(jié)論：
　　以GEN-CS為載體，采用離子交聯(lián)法制備的TAM-GEN-CS-NPs形狀為類圓形或圓形、粒度分布均勻、具有較高載藥量和較好緩釋性能；激光共聚焦觀察結(jié)果初步顯示，TAM-GEN-CS-NPs對MCF-7細(xì)胞具有靶向性；MTT結(jié)果顯示TAM-GEN-CS-NPs對MCF-7細(xì)胞增殖抑制