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文檔簡介
1、研究目的:
p53是重要的抑癌基因,其突變或失活與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切,目前認(rèn)為將具有正常功能的抑癌基因?qū)肽[瘤細(xì)胞內(nèi),可以恢復(fù)突變或失活基因的功能。重組人p53腺病毒(Ad-p53)由腺病毒載體DNA和人p53基因重組而成,可將野生型p53基因?qū)肽[瘤細(xì)胞內(nèi)從而恢復(fù)p53的正常功能。他莫昔芬(Tamoxifen,TAM)為雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERMs),在雌激素受體陽性的乳腺癌治療中得到廣泛應(yīng)用。我們通過觀察Ad-p53感
2、染乳腺癌細(xì)胞系MCF-7后的形態(tài)學(xué)變化,分析感染后乳腺癌細(xì)胞的增殖抑制率、p53蛋白的表達(dá)水平和細(xì)胞的凋亡情況等,以及分析Ad-p53與他莫昔芬聯(lián)合使用對上述指標(biāo)的影響,探討兩者是否具有協(xié)同作用,為基礎(chǔ)與臨床研究乳腺癌治療的新方法提供理論依據(jù)。
研究方法:
1.比較各組細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化:用 Ad-p53(50MOI)、Ad-p53(50MOI)與他莫昔芬(5μmol/l)聯(lián)合作用MCF-7細(xì)胞,使用倒置顯微鏡觀察不同
3、處理組細(xì)胞的生長情況以及形態(tài)學(xué)變化。
2.比較各組細(xì)胞的增殖抑制率:用 Ad-p53(50MOI)、他莫昔芬(5μmol/l)、Ad-p53(50MOI)與他莫昔芬(5μmol/l)聯(lián)合作用MCF-7細(xì)胞,觀察24-96h各組細(xì)胞的增殖抑制率。
3.比較各組細(xì)胞 p53蛋白的表達(dá)水平:用 Ad-p53(50MOI)、他莫昔芬(5μmol/l)、Ad-p53(50MOI)與他莫昔芬(5μmol/l)聯(lián)合作用 MCF-7
4、細(xì)胞72h,觀察各組細(xì)胞p53蛋白的表達(dá)情況。
4.比較各組細(xì)胞的凋亡率:用Ad-p53(50MOI)、他莫昔芬(5μmol/l)、Ad-p53(50MOI)與他莫昔芬(5μmol/l)聯(lián)合作用MCF-7細(xì)胞72h,流式細(xì)胞儀AnnexinV-FITC/PI雙標(biāo)法檢測分析不同處理組MCF-7細(xì)胞的凋亡情況。
研究結(jié)果:
1.Ad-p53感染 MCF-7細(xì)胞后,細(xì)胞生長緩慢,形態(tài)不規(guī)則且細(xì)胞質(zhì)均一性差;Ad-
5、p53與他莫昔芬聯(lián)合作用 MCF-7細(xì)胞,細(xì)胞幾乎無增長,細(xì)胞出現(xiàn)皺縮、變圓,細(xì)胞懸浮現(xiàn)象明顯增加。
2.Ad-p53感染MCF-7細(xì)胞24h-96h后增殖抑制率分別為7.16%±0.39%,25.28%±0.95%,36.86%±0.82%及62.12%±1.01%;Ad-p53與他莫昔芬聯(lián)合作用MCF-7細(xì)胞24h-96h增殖抑制率分別為11.76%±0.86%,39.92%±0.47%,56.92%±0.68%及69.4
6、9%±0.56%。
3.Ad-p53與他莫昔芬聯(lián)合作用MCF-7細(xì)胞72h,細(xì)胞p53蛋白的表達(dá)水平明顯高于他莫昔芬單藥組,與Ad-p53組比較差異不明顯。
4.流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的凋亡率,Ad-p53處理MCF-7細(xì)胞72h后凋亡率為21.9%;他莫昔芬處理MCF-7細(xì)胞72h后凋亡率為17.5%,Ad-p53與他莫昔芬聯(lián)合作用MCF-7細(xì)胞72h后凋亡率為34.7%。
研究結(jié)論:
1.重組人p
7、53腺病毒感染乳腺癌MCF-7后,細(xì)胞生長緩慢且形態(tài)學(xué)發(fā)生明顯改變,且當(dāng)與他莫昔芬聯(lián)合使用時細(xì)胞生長幾乎停止,形態(tài)學(xué)變化出現(xiàn)時間早且變化更加明顯。
2.重組人p53腺病毒或他莫昔芬單獨作用乳腺癌MCF-7細(xì)胞后,MTS法檢測細(xì)胞的增殖抑制率顯著增加;當(dāng)Ad-p53與他莫昔芬聯(lián)合作用MCF-7細(xì)胞,MCF-7細(xì)胞的增殖抑制率在各時期均高于單藥組。
3.重組人p53腺病毒可誘導(dǎo)乳腺癌MCF-7細(xì)胞表達(dá)p53蛋白,且p53
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