他莫昔芬對乳腺癌細胞周期蛋白E的影響及其信號機制研究.pdf

1、研究背景及目的：在乳腺癌腫瘤細胞和組織中，可觀察到野生型周期蛋白 E（CCNE）表達上調(diào)，同時伴隨大量低分子量周期蛋白E（LMW-CCNE）的生成。LMW-CCNE表達水平可預(yù)示乳腺癌患者臨床預(yù)后不良和對抗雌激素治療。他莫昔芬（TAM）長時間用于乳腺癌治療可引起藥物耐受及乳腺癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移,但其機制尚未明了。本研究旨在探討4-羥基他莫昔芬(OHT，TAM的活性形式）對乳腺癌細胞CCNE蛋白剪切、細胞遷移的影響及其信號機制。
　　方法

2、：采用雌激素受體（ER）陽性/G蛋白偶聯(lián)受體30（GPR30）陽性乳腺腫瘤細胞MCF-7和ER陰性/GPR30陽性細胞SK-BR-3為模型系統(tǒng)，以ER陰性/GPR30陰性細胞MDA-MB-231作為對照。常規(guī)細胞培養(yǎng)，以O(shè)HT刺激模型細胞，通過蛋白印跡法觀察蛋白質(zhì)分子量變化，細胞劃痕法觀察細胞遷移變化；采用GPR30抑制劑G15或表皮生長因子受體（EGFR）抑制劑（EI）預(yù)處理模型細胞，或siRNA轉(zhuǎn)染沉默靶基因表達，觀察這些因素對OH

3、T誘導(dǎo)CCNE蛋白剪切和細胞遷移的影響。
　　結(jié)果：(1)雌激素（E2）可誘導(dǎo)乳腺癌MCF-7細胞CCNE剪切及細胞遷移，但OHT不能阻斷E2誘導(dǎo)的上述效應(yīng)，提示E2誘導(dǎo)的效應(yīng)可能為非雌激素受體α（estrogen receptorα）依賴性。(2)采用OHT單獨處理MCF-7或SK-BR-3細胞，可觀察到類似于E2引起的CCNE蛋白剪切效應(yīng)，而OHT對MDA-MB-231細胞CCNE無明顯影響。以不同濃度的OHT（1~20μM）

4、處理培養(yǎng)MCF-7和SK-BR-3細胞，發(fā)現(xiàn)1μM OHT即可誘導(dǎo)CCNE的蛋白剪切反應(yīng)，呈量效依賴關(guān)系；時效觀察顯示，OHT在作用1h即可誘導(dǎo)明顯效應(yīng)，可持續(xù)~24 h。結(jié)果提示，OHT誘導(dǎo)的上述效應(yīng)可能與GPR30有關(guān)，其特點為快速而持續(xù)。(3) GPR30特異性抑制劑G15（1μM）或siRNA沉默GPR30表達可顯著抑制或消除OHT誘導(dǎo)MCF-7細胞CCNE蛋白剪切；G15明顯抑制OHT誘導(dǎo)的細胞遷移，提示OHT誘導(dǎo)的MCF-7

5、細胞反應(yīng)可能是通過 GPR30實現(xiàn)的。(4) EGF刺激可誘導(dǎo)類似OHT引起的CCNE反應(yīng)，而細胞外信號激活蛋白激酶（ERK）磷酸化活化的抑制劑U0126或EGFR的抑制劑均可顯著抑制或消除OHT誘導(dǎo)細胞CCNE蛋白剪切。
　　結(jié)論:（1）OHT誘導(dǎo)MCF-7乳腺癌細胞CCNE的蛋白剪切，同時促進細胞遷移（2）OHT通過 GPR30-EGFR-ERK信號通路誘導(dǎo) CCNE蛋白剪切和細胞遷移;（3）GPR30介導(dǎo)的CCNE蛋白剪切和