β-呋喃果糖苷酶單克隆抗體的研制及其在蜂蜜摻假ELISA中的應用.pdf

1、蜂蜜是蜜蜂從開花植物的花中采得的花蜜在體內經過轉化并吐回蜂巢中釀制成的。蜂蜜的成分除了葡萄糖、果糖外，還含有豐富的各種維生素、礦物質和氨基酸。其味道甜蜜，所含的單糖不需要經消化就可以被人體吸收，對婦、幼特別是老人更具有良好的保健作用，因而是一種營養(yǎng)豐富的天然滋養(yǎng)食品。蜂蜜的需求量很大，受利益驅使，近年來國內蜂蜜摻假造假現象十分嚴重，危害消費者身體健康，并嚴重阻礙中國蜂業(yè)的健康發(fā)展。
　　 檢測摻假蜂蜜的方法有很多，例如3C/12

2、C同位素比率分析法、高效陰離子交換色譜-脈沖安培檢測法、雙果糖酐(DFAs)檢測法、高效液相色譜法、近紅外光譜法、旋光法、高效毛細管電泳等，但這些方法都或多或少的存在著設備要求高、操作復雜、鑒定類型單一等缺點。而免疫學方法，特別是酶聯免疫吸附法(ELISA)，由于其具有靈敏度高、特異性強、檢測速度快、操作簡單等優(yōu)點，為蜂蜜摻假的檢測提供了新的思路。
　　 β-呋喃果糖苷酶（β-fructofurnosidase）是食品工業(yè)中用來

3、水解蔗糖的D-果糖β糖苷的果糖苷鍵的酶，在高濃度的蔗糖溶液中，β-呋喃果糖苷酶可催化轉糖基作用，在蔗糖的果糖基上通過β-(2，1)糖苷鍵連接1～3個果糖而形成果糖寡聚體。在低濃度蔗糖溶液中，β-呋喃果糖苷酶則主要是催化蔗糖水解，生成果糖和葡萄糖。如果將蔗糖水解后的果糖和葡萄糖摻入蜂蜜中，用一般的方法會難以鑒別，而通過檢測蜂蜜中摻入轉化糖而殘留的β-呋喃果糖苷酶有助于確定是否存在摻糖造假。
　　 本研究旨在建立一種快速、靈敏、簡便

4、且經濟的β-呋喃果糖苷酶酶聯免疫檢測方法并將其應用于植物轉化糖類的蜂蜜摻假檢測為目的。采用雜交瘤技術制備抗β-呋喃果糖苷酶單克隆抗體并建立雙抗夾心ELISA法檢測蜂蜜中β-呋喃果糖苷酶殘留的方法。通過對比不同來源的蔗糖轉化酶，分別采用考馬斯亮藍法和BCA法，SDS-PAGE測定其蛋白質濃度和純度，結果表明每10mg蔗糖酶溶于1mL超純水中所得溶液蛋白濃度為5.6mg/mL，且純度很高。用其作為免疫原免疫小鼠后，采用雜交瘤技術獲得9株雜交

5、瘤細胞株，分別命名為1D6F2、8F8C5、8F8A9、1D6D12、8F8G3、8F8A6、8F8F10、1D6B10、1D6B11。用前四株制備4種腹水，制備的腹水效價基本在1:16，000以上，腹水以及包被抗原的工作濃度分別為1:16000和1:8000。通過相加實驗測定8F8C5和8F8A9兩株是針對不同抗原表位，并以此為基礎建立雙抗夾心ELISA的檢測方法，檢驗建立后的雙抗夾心ELISA法特異性良好，敏感性高，無明顯的交叉反應