抗鹽酸氨丙啉單克隆抗體的研制及其ELISA檢測方法的初步建立.pdf

1、鹽酸氨丙啉(APL)為傳統(tǒng)的化學(xué)合成類抗球蟲藥，常作為藥物和飼料添加劑用于畜禽疾病的預(yù)防和治療。由于大量和長期使用APL，造成藥物在動物組織內(nèi)殘留。因此，檢測并限制肉、乳、蛋等動物性食品中APL的殘留日益受到廣泛關(guān)注。歐盟規(guī)定在可食性動物組織中APL的最高殘留限量分別為肌肉/皮膚/脂肪/肝臟0.2mg/kg，腎臟0.4mg/kg，蛋為1.0mg/kg。 目前檢測APL殘留的化學(xué)方法有分光光度法、高效液相色譜法(HPLC)、液相色

2、譜法(LC)，這些化學(xué)方法雖然非常敏感、準(zhǔn)確，但耗時長、耗資大，人員素質(zhì)要求高，不適合大量樣品的篩選測定，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)作為一種快速、特異和靈敏度較高的免疫檢測技術(shù)正逐漸應(yīng)用于藥物殘留的檢測。為此，本論文在APL殘留檢測的酶免疫分析方法方面進(jìn)行了初步研究工作，以期探討測定APL殘留的靈敏、快速、方便的檢測方法，為科學(xué)研究與實(shí)際應(yīng)用提供資料。本研究應(yīng)用戊二醛法將APL與載體蛋白偶聯(lián)制備免疫原，以此免疫BALB/c小鼠，并取其

3、脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞(SP2/0)融合，通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)篩選，最終獲得一株能分泌抗APL單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，命名為APL-3D2-11-(7)。特異性實(shí)驗表明，該單克隆抗體僅與APL反應(yīng)，而不能與相似結(jié)果的硫胺素以及其他小分子反應(yīng)，顯示該單克隆抗體具有良好特異性。以研制獲得的單克隆抗體建立了檢測APL的間接競爭ELISA測定方法。方陣實(shí)驗確定了包被抗原最佳包被濃度(1∶6000)，腹水最佳稀釋度(1∶500)，酶標(biāo)