法夫酵母胞內(nèi)6G-呋喃果糖苷酶的分離純化及性質(zhì)研究.pdf

1、法夫酵母胞內(nèi)6G-呋喃果糖苷酶，在以高濃度蔗糖為底物時(shí)，能夠生產(chǎn)新科斯糖作為主要轉(zhuǎn)糖基產(chǎn)物。新科斯糖(neokestose)是一種蔗果三糖族低聚糖，由果糖基C-2與蔗糖分子中的葡萄糖基C-6位相連所得，與其他低聚果糖相比具有更好的益生菌功能和穩(wěn)定的化學(xué)特性。
　　 論文以法夫酵母（Xanthophyllomyces dendrorhous 269）為出發(fā)菌株，搖瓶發(fā)酵收集菌體后，對(duì)法夫酵母的破壁方法進(jìn)行了研究。結(jié)果表明：高壓細(xì)胞

2、破碎方法的破壁率為89.8％，高壓均質(zhì)方法的破壁率達(dá)到87.5％，均明顯優(yōu)于凍融法的50.1％。然而，高壓均質(zhì)法破壁率雖然較高，但是不能進(jìn)行溫度控制，使得酶活性受到影響；而采用高壓細(xì)胞破碎儀進(jìn)行破碎，蛋白質(zhì)的含量較高，酶的活力也大大高于其他的破碎方法。
　　 本文對(duì)胞內(nèi)6G-呋喃果糖苷酶的分離純化也進(jìn)行了研究。粗酶液經(jīng)聚乙二醇（PEG)20000濃縮后，上DEAE纖維素52陰離子交換柱兩次層析得到電泳純的酶蛋白，總酶活回收率為1

3、3.4％，比酶活為238.64 U/mg，比粗酶液提高了35倍。經(jīng)SDS-PAGE分析，胞內(nèi)6G-呋喃果糖苷酶的分子量約為33 kDa。
　　 純化后的胞內(nèi)6G-呋喃果糖苷酶的酶學(xué)性質(zhì)研究表明，胞內(nèi)6G-呋喃果糖苷酶的最適溫度為45℃，最適pH為6.4；在pH4.0～7.0的范圍內(nèi)和小于45℃時(shí)具有較好的穩(wěn)定性。Ca2+，Li+，Mn2+，Ba2+和Al3+對(duì)酶具有1.25?1.4倍的激活作用，Zn2+對(duì)酶活性有較小的抑制作用，

4、而K+和Mg2+則沒有顯著的影響。EDTA對(duì)酶活力有顯著的激活作用，而SDS則具有明顯的抑制作用，殘余酶活僅為65％。對(duì)于胞內(nèi)6G-呋喃果糖苷酶的轉(zhuǎn)移活性，米氏常數(shù)Km和最大反應(yīng)速率 Vmax分別為511 mmol/l、233 μmol/(min·mg)；水解活性的Km，VmaX值分別是62 mmol/l和164 μmol/(min·mg)，其底物抑制的解離常數(shù)877 mmol/l。在40％蔗糖作為底物時(shí)，最大neo-FOS的產(chǎn)量為73