斜臥青霉β-半乳糖苷酶的分離純化及分子構(gòu)造研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、β-D-半乳糖苷酶（EC3.2.1.23）簡稱乳糖酶，不僅能分解乳糖為半乳糖和葡萄糖，而且還具有轉(zhuǎn)糖基的活性，合成功能性的低聚糖，二者在食品、藥品和分析化學(xué)等領(lǐng)域有著重要作用。近年來，伴隨功能糖生物學(xué)的快速發(fā)展，β-D-半乳糖苷酶成為乳糖水解和低聚糖合成的重要工具酶，受到了人們前所未有的青睞。
　　本研究在已篩選到的一株高產(chǎn)低聚半乳糖斜臥青霉L-7的基礎(chǔ)上，通過單因素和正交試驗設(shè)計，優(yōu)化菌株 L-7β-半乳糖苷酶的產(chǎn)酶條件為：乳糖

2、質(zhì)量濃度為70g/L、酵母浸粉質(zhì)量濃度10g/L、蛋白胨濃度為10g/L、K2HPO4為2.5 g/L，最佳培養(yǎng)溫度為30℃，自然 pH6.0，裝液量50mL/250mL，最佳的接種量為106個/mL，搖床轉(zhuǎn)速為180r/min，搖瓶培養(yǎng)32h后，β-D-半乳糖苷酶活力可達(dá)153.27 U/g，是優(yōu)化前的5倍。此時，高效液相色譜（HPLC）分析發(fā)酵液中的低聚半乳糖產(chǎn)量為30.2g/L。菌株L-7發(fā)酵產(chǎn)生的β-D-半乳糖苷酶經(jīng)過細(xì)胞超聲破

3、碎、硫酸銨分級鹽析、透析脫鹽、DEAE-Sephadex A-50離子強(qiáng)度梯度層析、Sephdex G-100凝膠柱層析后，SDS-PAGE電泳鑒定為單一條帶，相對分子質(zhì)量約為110KD。β-D-半乳糖苷酶的適反應(yīng)溫度和pH分別為60℃和6.0，且在60℃以下和pH3.0—7.0時有較高的穩(wěn)定性；Mg2+、Mn2+對β-半乳糖苷酶活性有顯著的激活作用，Cu2+、Fe2+、和Zn+對酶活力有較強(qiáng)的抑制作用。該菌株L-7產(chǎn)生的β-半乳糖苷酶

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