保肝藥物活性篩選方法的建立及應(yīng)用.pdf

1、目的：
　　 (1)建立一種穩(wěn)定便捷的保肝藥物活性篩選方法，尋找獐牙菜苦苷熱轉(zhuǎn)化產(chǎn)物保肝作用的活性部位，以期明確青葉膽抗肝炎功效的物質(zhì)基礎(chǔ)。(2)建立作用機(jī)理不同的5種化學(xué)性肝損傷模型，觀察傣醫(yī)解藥“雅解沙把”的保肝作用，初步探索其作用機(jī)理，為其臨床用于防治肝損傷提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：
　　 (1)用CC14復(fù)制小鼠急性肝損傷模型，考察CCl4染毒劑量、染毒時(shí)間及染毒途徑對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，選擇陽性對照藥物，

2、多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)來考察方法的穩(wěn)定性。
　　 (2)用CCl4小鼠急性肝損傷模型，通過藥理篩選與化學(xué)分離緊密結(jié)合的追蹤性研究方法，尋找獐牙菜苦苷熱轉(zhuǎn)化產(chǎn)物保肝作用的活性部位。
　　 (3)用CCl4、D-GLaN、AAP、TAA、ANIT復(fù)制5種作用機(jī)理不同的化學(xué)性肝損傷模型，對傣醫(yī)解藥“雅解沙把”保肝作用的有效性進(jìn)行驗(yàn)證，并初步探討其作用機(jī)理。
　　 結(jié)果：
　　 (1)對小鼠一次性腹腔注射0.2％CCl4橄

3、欖油溶液0.1ml/10g.bw，染毒20h后，模型組小鼠血清ALT、AST均高于正常組(P＜0.01)，可成功復(fù)制急性CCl4肝損傷模型；聯(lián)苯雙酯組小鼠血清ALT低于模型組(P＜0.01)，提示其有保肝降酶作用，故選擇聯(lián)苯雙酯作為陽性對照藥；經(jīng)多次方法學(xué)考察，確定已建立了穩(wěn)定的保肝藥物活性篩選實(shí)驗(yàn)方法。
　　 (2)初步篩選結(jié)果顯示獐牙菜苦苷熱轉(zhuǎn)化產(chǎn)物水溶部分1200mg/kg組小鼠血清ALT低于模型組(P＜0.01)；獐牙菜

4、苦苷熱轉(zhuǎn)化產(chǎn)物沉淀部分1200mg/kg及400mg/kg組ALT低于模型組(P＜0.05、P＜0.01)。經(jīng)多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與模型組相比，獐牙菜苦苷熱轉(zhuǎn)化產(chǎn)物水溶部分及沉淀部分400mg/kg組小鼠血清ALT、AST低于模型組(P＜0.01、P＜0.05)；沉淀部分200mg/kg、100mg/kg組小鼠血清ALT、AST均可低于模型組(P＜0.05)。追蹤篩選實(shí)驗(yàn)顯示從沉淀部分分離出的樣品A組小鼠血清ALT低于模型組(P＜0.05

5、)。
　　 (3)分別對小鼠一次性腹腔注射800mg/kgD-Galn溶液24h后，一次性灌胃給予小鼠500mg/kgAAP溶液24h后，對小鼠一次性腹腔注射100mg/kgTAA溶液16h后，模型組小鼠血清ALT及AST均可高于正常組(P＜0.01)；一次性灌胃給予小鼠100mg/kgANIT溶液48h后，模型組小鼠血清ALT、Tbil均高于正常組(P＜0.01)。提示上述實(shí)驗(yàn)方法均可成功復(fù)制急性肝損傷模型。
　　 (

6、4)“雅解沙把”高劑量組小鼠血清ALT低于CCl4致肝損傷模型組(P＜0.01)，低劑量組有作用趨勢(P＞0.05)?！把沤馍嘲选备邉┝拷M小鼠血清ALT低于D-Galn致肝損傷模型組(P＜0.05)，而對抑制AST的升高僅有作用趨勢(P＞0.05)?！把沤馍嘲选备邉┝拷M小鼠血清ALT低于AAP致肝損傷模型組(P＜0.05)，而對抑制AST的升高僅有作用趨勢(P＞0.05)?！把沤馍嘲选备邉┝拷M對降低TAA致小鼠血清ALT的升高僅有作用趨

7、勢(P＞0.05)?！把沤馍嘲选备邉┝拷M小鼠血清ALT低于ANIT致肝損傷模型組(P＜0.05)。提示“雅解沙把”對以上5種作用機(jī)理不同的的化學(xué)性肝損傷均具有一定的保肝降酶作用。
　　 結(jié)論：
　　 (1)對小鼠一次性腹腔注射0.2％CCl4橄欖油溶液0.1ml/10g.bw，染毒20h，可以成功復(fù)制結(jié)果穩(wěn)定的小鼠CCl4急性肝損傷模型。
　　 (2)獐牙菜苦苷熱轉(zhuǎn)化物水溶部分及沉淀部分對CCl4所致急性肝損傷小

8、鼠血清ALT、AST的升高均有一定的降低作用；由沉淀部分分離出的樣品A組對CCl4所致急性肝損傷小鼠血清ALT的升高亦有一定的降低作用；提示獐牙菜苦苷熱轉(zhuǎn)化物水溶部分、沉淀部分及沉淀部分分離出的樣品A具有一定的保肝降酶作用。
　　 (3)分別給予小鼠0.2％CCl40.1ml/10g.bw、800mg/kgD-Galn、500mg/kgAAP、100mg/kgTAA、100mg/kgANIT肝毒劑，均可成功復(fù)制作用機(jī)理不同的小鼠