油菜蜂花粉保肝活性成分的分離及其保肝機(jī)制初探.pdf

1、蜂花粉是自然中存在的營(yíng)養(yǎng)最豐富的的天然食品資源之一，油菜蜂花粉是我國(guó)最大宗的蜂花粉，我國(guó)油菜蜂花粉的年產(chǎn)量在300噸以上。油菜蜂花粉富含各種營(yíng)養(yǎng)成分和活性物質(zhì)如多糖、氨基酸、蛋白質(zhì)、脂肪酸、黃酮類化合物等，具有治療前列腺炎、抗腫瘤、保肝護(hù)肝、提高免疫力等多種生物活性，其功能性成分已經(jīng)成為目前研究重點(diǎn)之一。
　　本文以油菜蜂花粉為研究對(duì)象，對(duì)油菜蜂花粉進(jìn)行了系統(tǒng)的分離純化及細(xì)胞學(xué)篩選，對(duì)分離得到的保肝活性成分進(jìn)行了保肝機(jī)理的分析，為

2、油菜蜂花粉保肝活性開發(fā)提供了參考依據(jù)。
　　1.油菜蜂花粉保肝活性成分的分離純化。采用溶劑萃取、ODS柱層析、高效液相色譜法對(duì)油菜蜂花粉進(jìn)行逐級(jí)分離純化，最終得到四個(gè)黃酮醇苷 P2~P5以及一個(gè)含有P1和P2的混合組分C1，經(jīng)質(zhì)譜和核磁鑒定P2~P5依次為：槲皮素3-O-β-D-葡萄糖-(2→1)-β-D-葡萄糖苷(QMP)、山奈酚3,4’-雙-O-β-D-葡萄糖苷(KMG)、5,7,4’-三羥基-8-甲氧基黃酮醇-3-O-β-D

3、-槐糖苷(SMP)、山奈酚3-O-β-D-葡萄糖-(2→1)-β-D-葡萄糖苷(KMP)，其中5,7,4’-三羥基-8-甲氧基黃酮醇-3-O-β-D-槐糖苷（SMP）屬首次從油菜花粉中分離得到。
　　2.油菜蜂花粉保肝活性成分的細(xì)胞學(xué)篩選。以四氯化碳（CCl4）誘導(dǎo)人正常肝細(xì)胞（L-02）建立體外細(xì)胞損傷模型，采用MTT法（噻唑蘭比色分析法）測(cè)定細(xì)胞存活率并以其作為活性篩選指標(biāo)，對(duì)油菜蜂花粉各組分進(jìn)行細(xì)胞學(xué)篩選。結(jié)果表明體外細(xì)胞損

4、傷模型的造模濃度以10mM的CCl4為佳，分級(jí)萃取物中正丁醇萃取物活性最高，對(duì)其進(jìn)行層析分離，各洗脫組分中A2活性最高，100μg/mL和200μg/mL劑量組細(xì)胞存活率分別為模型組的2.41倍和2.03倍，定性分析顯示為黃酮醇苷類物質(zhì)；組分A2經(jīng)進(jìn)一步分離純化及細(xì)胞學(xué)篩選最終得到一個(gè)活性化合物QMP和一個(gè)活性組分C1，兩者的保肝活性與劑量呈正相關(guān)，其中高劑量組即200μg/mL組細(xì)胞相對(duì)存活率分別為模型組的2.64和2.66倍?；衔?/p>

5、KMP、KMG在體外四氯化碳肝損傷細(xì)胞模型中無保肝活性，化合物SMP的活性有待考察。
　　3.黃酮醇苷及其苷元的構(gòu)效關(guān)系。為了考察QMP、槲皮素、山奈酚的保肝活性，以不同濃度的 QMP、槲皮素、山奈酚干預(yù)四氯化碳致?lián)p的肝細(xì)胞，測(cè)定了三者的 IC50值。結(jié)果表明槲皮素對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)損傷的肝細(xì)胞的保護(hù)效果最好，其 IC50值為70.28μM；山奈酚和 QMP次之，IC50值分別為102.26μM和132.64μM。QMP、KMP、KM

6、G羥基糖基化使得其活性低于自身苷元，黃酮醇C3’-OH的強(qiáng)電離能力使得槲皮素表現(xiàn)出比山奈酚更強(qiáng)的保肝活性。
　　4.活性成分保肝機(jī)理研究。以SOD、MDA、LDH作為指標(biāo)從氧化應(yīng)激的角度考察了QMP、山奈酚、槲皮素的保肝機(jī)理。結(jié)果顯示，活性化合物QMP及黃酮醇苷元山奈酚、槲皮素的干預(yù)可極大的減輕四氯化碳致?lián)p肝細(xì)胞的脂質(zhì)過氧化水平，脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛MDA含量降低；胞內(nèi)抗氧化體系活力增強(qiáng)，SOD活力升高；細(xì)胞膜穩(wěn)定性增強(qiáng)使得LDH