野菊花保肝活性成分的分離、鑒定及初步分析.pdf

1、野菊花為菊科植物野菊ChrysanthemumindicumL.的頭狀花序,本文以產(chǎn)于安徽的藥用植物野菊花為研究對象,對其醇提物和不同溶劑萃取物進(jìn)行抗急性肝損傷測試,從中發(fā)現(xiàn)其中保肝活性較強(qiáng)的藥效部位;對活性部位進(jìn)行分離得到8個單體成分,并鑒定各單體成分結(jié)構(gòu);將得到的單體進(jìn)行肝星狀細(xì)胞異常增殖抑制活性篩選;在此基礎(chǔ)上,對不同萃取部分的化學(xué)成分進(jìn)行HPLC分析,從而探索野菊花保肝活性的物質(zhì)基礎(chǔ)。本論文分為四部分,具體研究內(nèi)容如下:

2、　　1、野菊花提取物抗急性肝損傷活性測試
　　將野菊花用80％乙醇回流提取3次,每次2h,得到野菊花醇提物。將此提取物依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取得到各萃取物(石油醚層、乙酸乙酯層、正丁醇層)。采用ConA尾靜脈注射誘導(dǎo)小鼠免疫性肝損傷模型的方法,對野菊花醇提物、乙酸乙酯層、正丁醇層抗急性肝損傷效果進(jìn)行評價,結(jié)果顯示以上部分均具有保肝活性,其中乙酸乙酯層比正丁醇層具有更好的保肝活性。
　　2、野菊花活性部位化學(xué)成分的分

3、離與鑒定
　　應(yīng)用大孔樹脂、正相硅膠、反相硅膠、SephadexLH-20葡聚糖凝膠及制備型高效液相色譜等分離手段對野菊花有效部位進(jìn)行分離,得到8個黃酮類化合物,通過HPLC、LC-MS、NMR分析后,鑒定出化合物分別為6-甲氧基-5,7,4′-三羥基黃酮(高車前素,Ⅰ)、5,6,7,4′-四羥基黃酮(野黃芩素,Ⅱ)、3,6,8-三甲氧基-5,7,3′,4′-四羥基黃酮,Ⅲ、山奈酚-7-O-β-D-葡萄糖基-(1→6)-α-L-鼠

4、李糖苷(異野漆樹苷,Ⅳ)、5,7,4'-三羥基-3,6,3'-三甲氧基黃酮(棕鱗矢車菊黃酮素,Ⅴ)、刺槐素-7-O-β-D-葡萄糖基-(1→6)-α-L-鼠李糖苷(蒙花苷,Ⅵ)、5,7-二羥基-4'-甲氧基黃酮(刺槐素,Ⅶ)、3,5,7,3',4'-五羥基黃酮(槲皮素,Ⅷ)。其中化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ均為首次從野菊花中分離得到。
　　3、野菊花保肝活性部位分離的單體成分抑制肝星狀細(xì)胞增殖能力測試
　　采用MTT法對分離得到的野

5、菊花單體成分對TGF-β1刺激的肝星狀細(xì)胞(HSC-T6)進(jìn)行保肝活性篩選。評價不同單體抑制HSC增殖的能力。結(jié)果顯示受試的10個化合物(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ,含前期自野菊花中分離的3個咖啡?？鼘幩?對HSC的增值均表現(xiàn)出一定的抑制活性。其中以化合物Ⅷ和3個咖啡?？鼘幩?本課題組前期分離得到)活性最為突出,IC50值<100μM。此外化合物Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ對HSC-T6的增殖也顯示出較好的抑制活性,IC50值在150～300μM。蒙

6、花苷(化合物Ⅵ)抑制增殖的能力最差,IC50值超過600μM。4、野菊花保肝活性成分的初步分析
　　對野菊花樣品進(jìn)行初步的HPLC分析,通過比對分離得到的8個單體在野菊花樣品中的保留時間(RT)確定單體在樣品中的存在,運(yùn)用峰面積歸一法計算分離得到的8個單體的含量。結(jié)果表明分離得到的8個化合物在野菊花提取物及不同萃取部分中的含量分布存在明顯的差異。在被測的8個化合物中,以蒙花苷(Ⅵ)、槲皮素(Ⅷ)等常見化合物的含量較高,化合物Ⅴ的含