藥用石斛內(nèi)生真菌的分離鑒定及活性成分初步研究.pdf

1、內(nèi)生真菌是指那些在其生活史中的某一段時期生活在植物組織內(nèi)，對植物組織沒有引起明顯病害癥狀的真菌。近年來的研究表明，內(nèi)生真菌可以產(chǎn)生與宿主相同或相似的代謝產(chǎn)物，對相應(yīng)的內(nèi)生真菌及其代謝產(chǎn)物的研究已經(jīng)成為尋找藥物來源的一種新途經(jīng)。 本文以名貴藥用植物--石斛(DendrobiumSW.)為實(shí)驗(yàn)材料，從8種石斛的根、莖、葉中分離得到92株內(nèi)生真菌，經(jīng)過篩選，在流蘇石斛莖、長蘇石斛葉中得到兩株炭角菌，分別編號為LSJ1和CSY1，并誘導(dǎo)

2、兩株菌產(chǎn)生有性繁殖結(jié)構(gòu)；采用形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)結(jié)合的方法對其進(jìn)行鑒定，鑒定結(jié)果顯示兩株菌均為Xylariavenosula；并測定了這兩株菌的發(fā)酵終點(diǎn)、胞內(nèi)及胞外多糖含量、胞內(nèi)及胞外水溶性蛋白含量、抑菌活性等。 β-谷甾醇是流蘇石斛的重要活性成分，對12株流蘇石斛內(nèi)生真菌進(jìn)行PD液體發(fā)酵培養(yǎng)，采用高效液相色譜(HPLC)法從其中三株菌(LSJ1、LSJ5、LSY4)的菌絲體中檢測出β-谷甾醇，含量依次為：7.94ug／g，0.2

3、74ug／g，11.51ug／g；采用形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)結(jié)合的方法對這三株菌進(jìn)行鑒定，鑒定結(jié)果顯示LSJ1為：Xylaravenosula，LSJ5屬于Yalsaceae，LSY4為：Colletotrichumgloeosporioides· 對多年生(金釵)石斛總DNA的提取方法進(jìn)行了優(yōu)化，改進(jìn)了提取液配方，提高了CTAB的濃度(2.5％)和NaCl濃度(1.4mol·L-1)，并在酚氯仿抽提后的水相中加入0.5倍體積的高濃