漸危藥用植物黃檗產(chǎn)活性成分內(nèi)生真菌的初步研究.pdf

1、本文選用珍稀藥用植物黃檗，采用常規(guī)的內(nèi)生真菌分離方法，從其中分離出了13種內(nèi)生真菌，并以此為對(duì)象進(jìn)行以下研究工作。 結(jié)合內(nèi)生真菌的生長曲線，檢測生物堿的沉淀反應(yīng)和鹽酸小檗堿的特異性反應(yīng)，對(duì)所得菌株進(jìn)行初篩得到S6和L2可能產(chǎn)小檗堿；通過擴(kuò)大培養(yǎng)，利用薄層層析(TLC)進(jìn)行復(fù)篩，得到一株產(chǎn)小檗堿的內(nèi)生真菌菌株S6；對(duì)S6發(fā)酵培養(yǎng)物中有效成分的提取過程進(jìn)行了摸索。 通過對(duì)S6的擴(kuò)大培養(yǎng)，對(duì)提取物的TLC進(jìn)行薄層掃描，發(fā)現(xiàn)提取

2、物的吸收曲線與標(biāo)準(zhǔn)品的吸收曲線近似；提取物的紅外光譜檢測(IR)和核磁共振(NMR)的氫譜檢測結(jié)果顯示：S6培養(yǎng)液提取物的圖譜中含有標(biāo)準(zhǔn)品圖譜中比較多的基團(tuán)和鍵。據(jù)此判斷，所得到的S6提取物應(yīng)為鹽酸小檗堿。 通過對(duì)不同固體培養(yǎng)基中菌絲的生長速率和長勢(shì)分析，篩選出實(shí)驗(yàn)室中適合S6菌株生長的固體培養(yǎng)基；通過對(duì)不同液體培養(yǎng)基中S6的生物量和代謝產(chǎn)物產(chǎn)生量的對(duì)比，篩選出適合S6菌絲生長及產(chǎn)生物堿的液體培養(yǎng)基；利用最適液體培養(yǎng)基對(duì)其中的碳

3、源、氮源、pH和最適溫度進(jìn)行了篩選，結(jié)果顯示，麥芽糖，尿素，pH7.0和發(fā)酵溫度28℃分別是相應(yīng)的最佳條件。 采用L16(43)正交實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步優(yōu)化了菌株S6的發(fā)酵條件，得出最佳初始培養(yǎng)條件為：麥芽糖15g.L-1，尿素4.3g.L-1，pH7.0左右，裝液量150mL/300mL，培養(yǎng)溫度28℃，此配比也可做為菌株S6實(shí)驗(yàn)室的液體種子培養(yǎng)基的配比；次生代謝產(chǎn)物積累時(shí)的適宜發(fā)酵條件為：麥芽糖15g.L-1，尿素5.3g.L-1,