產(chǎn)喜樹堿內(nèi)生真菌的分離、鑒定及生物學(xué)活性研究.pdf

1、貴州大學(xué)碩士學(xué)位論文產(chǎn)喜樹堿內(nèi)生真菌的分離、鑒定及生物學(xué)活性研究姓名：張根申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：微生物學(xué)指導(dǎo)教師：王嘉福冉雪琴20070501貴州大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要在貴州省喀斯特地區(qū)生長的喜樹組織中篩選了80多株內(nèi)生真菌，包括根，莖，葉和果實。其中地上組織的內(nèi)生真菌較豐富，種類較多。80多株內(nèi)生真菌經(jīng)過擴大培養(yǎng)，分別將菌絲和發(fā)酵液用薄層層析、高效液相色譜、質(zhì)譜分析，證明內(nèi)生真菌株菌株S19產(chǎn)喜樹堿。對S19進(jìn)行了形態(tài)學(xué)研究，S19的

2、產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)、菌落形態(tài)符合鐮刀屬的分類特征。進(jìn)一步提取S19菌株的基因組，對其核糖體基因居間序列(ITS)進(jìn)行了分析，經(jīng)聚類分析表明，S19屬于鐮刀屬的腐皮鐮刀菌種。對S19發(fā)酵液所產(chǎn)喜樹堿的產(chǎn)率進(jìn)行了分析，結(jié)果表明，培養(yǎng)第四天S19產(chǎn)喜樹堿的得率最高，喜樹堿的產(chǎn)量為74048ttg喜樹堿／g干菌絲，四天后每升菌液中喜樹堿的含量為896士O34毫克喜樹堿。對S19所產(chǎn)喜樹堿的生物學(xué)活性進(jìn)行了研究。經(jīng)觀察，從S19菌株中提純的喜樹堿作用24小

3、時可使非洲綠猴腎細(xì)胞(Vero)皺縮，細(xì)胞膜呈泡狀，細(xì)胞從瓶壁大量脫落；采用熒光染色法(Ao／EB)，對S19所產(chǎn)喜樹堿引起VeTO細(xì)胞的凋亡率分析證明，作用72小時，細(xì)胞的凋亡率為13％，并且S19喜樹堿的作用劑量和時間與細(xì)胞的凋亡率呈線性增加關(guān)系。因此S19菌株提取的喜樹堿具有使非洲綠猴腎細(xì)胞調(diào)亡的作用。進(jìn)一步對S19喜樹堿致前列腺癌細(xì)胞凋亡的作用機制進(jìn)行了研究。采用Caspase3抗體經(jīng)Westernblot分析，表明S19感染前