野菊花保肝膠囊抗乙肝病毒及肝保護(hù)作用研究.pdf

1、基于本課題組前期對野菊花(Flos Chrysanthemi indici)大量的研究工作，本課題對從中提取并自行制備的野菊花保肝膠囊（以下簡稱為CBC）進(jìn)行了進(jìn)一步的研究。課題通過CBC體外抗HBV的藥效學(xué)研究，篩選出了既具有抗HBV作用又無毒性的藥物濃度；并通過最大給藥量法檢測急性毒性，進(jìn)一步評價CBC的安全性；在此基礎(chǔ)上，采用酒精致KM小鼠肝損傷以及刀豆蛋白A致KM小鼠肝損傷模型，進(jìn)一步評價了CBC的預(yù)防性肝保護(hù)作用。
　　

2、抗 HBV實驗中，應(yīng)用典型的體外篩選抗 HBV藥物細(xì)胞——HepG2.2.15細(xì)胞。采用CCK-8比色法檢測CBC對HepG2.2.15細(xì)胞的抑制作用，篩選出半數(shù)致死量（TC50）和最大無毒濃度（TC0），在此基礎(chǔ)上，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法測定CBC對第6 d、第9 d HepG2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)基中HBsAg和HBeAg的含量，探討其對HBV的作用。結(jié)果顯示，CBC對HepG2.2.15細(xì)胞有抑制作用，且抑制作用隨CBC濃度的減小而減弱

3、，其中TC50為5.014μg/ml。CBC對HepG2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)基中HBsAg和HBeAg均有抑制作用，且對后者的抑制作用強(qiáng)于前者；時間效應(yīng)方面，對第6d的抑制作用強(qiáng)于第9d。結(jié)合毒性實驗和抗原抑制實驗結(jié)果，表明CBC具有體外抗HBV作用。
　　急性毒性實驗中，參照《中藥、天然藥物急性毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》，采用最大給藥量法，最大給藥濃度（0.6089 g/ml），最大體積（40 ml/kg）給藥，1次/天，連續(xù)14天密

4、切觀察CBC作用于KM小鼠后各項指標(biāo)變化，進(jìn)一步評價CBC的藥物安全性。結(jié)果顯示，給藥組和正常組小鼠，各項指標(biāo)均正常，無死亡現(xiàn)象。此給藥劑量約為臨床擬用劑量（0.1 g/kg）的243倍，表明CBC用藥安全。
　　肝保護(hù)實驗中，選用KM小鼠建立兩種肝損傷模型，即酒精所致化學(xué)性肝損傷模型和Con-A所致免疫性肝損傷模型。應(yīng)用賴氏法測定血清中ALT及AST的酶活力，硫代巴比妥酸法測定肝勻漿中MDA的含量，WST-1法測定肝勻漿中SOD

5、的酶活力，ELISA法測定血清中TNF-α的含量，并觀察肝組織病理學(xué)變化，來綜合評判 CBC的保肝作用機(jī)制和療效。結(jié)果顯示，CBC能使肝損傷小鼠兩種血清轉(zhuǎn)氨酶的酶活力降低，肝勻漿中MDA含量降低、SOD酶活力升高，并使Con-A肝損傷小鼠血清TNF-α的含量降低，CBC各給藥組肝組織病理損傷程度均比模型組有不同程度減輕，表明CBC對兩種肝損傷有預(yù)防性的保護(hù)作用。
　　綜上所述，本論文首次對野菊花保肝膠囊進(jìn)行抗乙肝病毒及肝保護(hù)的藥效