野菊花多糖的提取分離、免疫活性研究及分子量測定.pdf

1、野菊花為菊科植物野菊(Chrysanthemum indicum L.)的干燥頭狀花序，又稱瘧疾草、苦薏、山菊花等。在我國，野菊花資源非常豐富，民間藥用歷史悠久，但絕大部分未開發(fā)利用，現(xiàn)有的野菊花產(chǎn)品有野菊花栓、野菊花注射液、菊藻丸等。因此，開發(fā)野菊花多糖具有重要的現(xiàn)實意義。本論文比較系統(tǒng)地對野菊花多糖進(jìn)行提取分離，對脫蛋白脫色素的工藝進(jìn)行優(yōu)選，對其免疫活性進(jìn)行系統(tǒng)研究，在此基礎(chǔ)上對其進(jìn)行分級純化，并采用高效凝膠滲透色譜法測定其純化組分

2、的分子量，以期為野菊花多糖的后續(xù)化學(xué)研究及產(chǎn)品開發(fā)提供可靠的理論基礎(chǔ)。
　　主要研究內(nèi)容如下：
　　1.本論文選取提取溫度、提取時間、料液比以及提取次數(shù)為考察因素，以野菊花多糖提取率為考察指標(biāo)，進(jìn)行單因素試驗。在此基礎(chǔ)上，采用正交設(shè)計法優(yōu)選得最佳提取工藝為：提取溫度90℃，提取時間1h，料液比1:32，提取次數(shù)3次，在此最佳工藝條件下野菊花多糖的提取率為16.11％，各個因素對野菊花多糖提取率的影響大小依次為：提取次數(shù)>提取

3、溫度>料液比>提取時間。
　　2.本論文采用大孔吸附樹脂，探討純化多糖時同步去除色素和蛋白質(zhì)的可行性，研究大孔吸附樹脂純化野菊花多糖的新工藝。以脫色率、蛋白質(zhì)去除率和野菊花多糖保留率為指標(biāo)，利用靜態(tài)吸附試驗篩選大孔吸附樹脂，并考察溫度、pH、野菊花多糖溶液質(zhì)量濃度以及振蕩轉(zhuǎn)速對其靜態(tài)吸附的影響；利用動態(tài)吸附試驗，考察流速和徑高比對其吸附性能的影響。使用篩選所得的大孔吸附樹脂LSA-21對野菊花多糖進(jìn)行純化的最佳工藝為：溫度40℃，

4、野菊花多糖溶液質(zhì)量濃度為7 mg·mL-1，pH值為5，轉(zhuǎn)速為180r·min-1，流速為3 BV/h，徑高比1:8。通過驗證試驗，脫色率可達(dá)80.90％，蛋白質(zhì)去除率為52.84％，多糖保留率為82.59％，其純化效果比較理想。
　　3.本實驗對脫蛋白脫色素后的野菊花多糖進(jìn)行系統(tǒng)的免疫活性研究，利用環(huán)磷酰胺腹腔注射制備小鼠免疫功能低下模型，觀察野菊花多糖對免疫功能低下小鼠碳廓清試驗的影響；測定小鼠體重及胸腺、脾臟重量，計算胸腺、

5、脾指數(shù)；采用二硝基氟苯誘導(dǎo)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)法(耳腫脹法)測定細(xì)胞免疫功能；檢測血清溶血素含量。實驗結(jié)果為：模型組小鼠的各項指標(biāo)均顯著降低(P<0.01)，野菊花多糖高、低劑量組的碳廓清指數(shù)分別為0.0278±0.0059、0.0199±0.0047，吞噬指數(shù)分別為5.3970±0.7356、4.8278±0.4801，耳腫脹度分別為5.23±0.98 mg、4.89±1.10 mg，血清溶血素分別為0.410±0.063、0.357±

6、0.058，且各指標(biāo)與模型組比較，均具有顯著性差異(P<0.01或P<0.05)。表明，野菊花多糖可增強環(huán)磷酰胺所致免疫功能低下小鼠的免疫功能。
　　4.在免疫活性研究的基礎(chǔ)上，本文對脫蛋白、脫色素后的野菊花多糖進(jìn)行進(jìn)一步的分級純化，并測定其分子量，以期為野菊花多糖的后續(xù)化學(xué)結(jié)構(gòu)研究及產(chǎn)品開發(fā)提供可靠地理論基礎(chǔ)。試驗利用DEAE-52和Sephadex G-50對多糖進(jìn)行純化，得到三個組分，分別命名為：CIP1、CIP2與CIP3