油菜蜂花粉ACE抑制物的制備及分離.pdf

1、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)將血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化為血管緊張素Ⅱ,還可以催化舒緩激肽的分解,導(dǎo)致血壓升高。通過抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的活性,可以達到降低血壓的效果。水解植物蛋白,篩選具有ACE抑制活性的水解物,這方面的研究成為熱點。
　　 本文比較了pH stat法、TNBS法和OPA法測定油菜蜂花粉蛋白的水解度,選用pH stat法測定油菜蜂花粉蛋白的水解度。水解120min時,0.5mg／mL水解物對ACE的抑制率達到55.24％,

2、水解度為8.97％。
　　 應(yīng)用酸性蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和堿性蛋白酶水解油菜蜂花粉,水解物對ACE均有抑制作用,其水解物對ACE的IC50分別為0.67mg／mL、0.55mg／mL、0.46mg／mL、0.35mg／mL。
　　 氨基酸分析顯示,蜂花粉和水解物中疏水氨基酸占總氨基酸的45.02％、49.43％,其中丙氨酸占總氨基酸的6.06％、6.73％,脯氨酸占總氨基酸的5.12％、13.12％。
　

3、　 水解物通過膜過濾分離,濃度為0.5mg／mL時,1500Da～5000Da水解物的ACE抑制率和得率都是最高的,ACE抑制率達到54.83％,得率為57％；大于5000Da水解物的ACE抑制率為49.64％,得率為5％；300Da～1500Da水解物的ACE抑制率為42.72％,得率為36.55％；小于300Da水解物的ACE抑制率僅為5.78％,得率為1.5％。
　　 四種蛋白酶的水解物經(jīng)過凝膠分離,發(fā)現(xiàn)ACE抑制活性較

4、強的組分主要集中在70 min和120min之間,對應(yīng)的分子量在146Da和1355Da之間。堿性蛋白酶水解物分離組分ACE抑制率最大,達到90％以上。
　　 油菜蜂花粉蛋白水解物經(jīng)過凝膠層析分離,得到六個組分,均有ACE抑制活性。其中,P-1、P-2和P-3與水解物相比,ACE抑制活性提高,總得率為80.6％；P-2對ACE的抑制活性最強,ACE抑制活性的IC50為90μg／mL,得率為23％；其次是P-3,ACE抑制活性的I

5、C50為120μg／mL,得率為21.8％；P-4、P-5和P-6組分與水解物相比,ACE抑制活性下降,總得率為17.1％。
　　 油菜蜂花粉凝膠層析組分P-2經(jīng)過制備型反相高效液相分離得到7個組分,各分離組分ACE抑制活性不同。H-5對ACE抑制活性最強,IC50為10μg／mL；其次是H-3,IC50為30μg／mL；H-2、H-4和H-6組分ACE抑制率分別為24.39％、14.08％和33.17％；H-1和H-7沒有AC