山楂蜂花粉多糖提取、分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定和生物活化的研究.pdf

1、近年來(lái)，花粉作為優(yōu)良的全營(yíng)養(yǎng)食物被全世界廣泛關(guān)注，掀起一股“花粉研究熱”，而且國(guó)內(nèi)對(duì)花粉的基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究也已經(jīng)全面開(kāi)展，并取得可喜成果，有些方面已進(jìn)入國(guó)際研究的前沿。山楂蜂花粉在中國(guó)北方產(chǎn)量巨大，充分利用我國(guó)山楂蜂花粉資源，對(duì)山楂蜂花粉進(jìn)行深入系統(tǒng)研究，使這一豐富資源的開(kāi)發(fā)和利用提高到一個(gè)新的水平，將會(huì)產(chǎn)生極大的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。 本文以山楂蜂花粉為原料，采用復(fù)合破壁法即采用機(jī)械破壁、冷凍破壁和酶法破壁三種方法進(jìn)行分花粉破

2、壁，以此達(dá)到較為理想的破壁效果。同時(shí)通過(guò)試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)熱水浸提、乙醇沉淀的工藝進(jìn)行了優(yōu)化，最后經(jīng)過(guò)脫蛋白、透析得到多糖粗品(CPP)。CPP通過(guò)DEAE Sepharose CL-6B凝膠柱層析進(jìn)一步純化得到CPP-1和CPP-2兩種組分。經(jīng)紅外光譜檢測(cè)證實(shí)具有多糖類(lèi)物質(zhì)的特征吸收峰。然后通過(guò)Sephadex G-100凝膠柱層析檢測(cè)為單一對(duì)稱峰，并通過(guò)高效凝膠色譜測(cè)得兩者分子量分別為3．7×105Da和7．8×104Da。通過(guò)氣相色譜測(cè)得

3、CPP-1由L-鼠李糖、L-果糖、D-阿拉伯糖、D-木糖、D-甘露糖、D-半乳糖和D-葡萄糖七種單糖組成，其摩爾比為0．67：0．44：10．16：0．66：1．03：5．51：9．94； CPP-2由L-鼠李糖、D-阿拉伯糖、D-甘露糖、D-半乳糖和D-葡萄糖五種單糖組成，摩爾比為2．12：9．82：3．60：0．89：5．56。經(jīng)部分酸水解甲基化分析，結(jié)合氣質(zhì)聯(lián)用儀，推斷出CPP-1和CPP-2是由1，5-L-Araf殘基組成的還原

4、性多糖。 本研究從清除DPPH自由基、抑制羥基自由基的產(chǎn)生和還原力、清除超氧陰離子自由基4個(gè)方面研究了CPP、CPP-1和CPP-2的體外抗氧化效果，結(jié)果表明粗多糖CPP和純化組分CPP-1、CPP-2對(duì)DPPH自由基的清除作用和羥基自由基的抑制作用明顯，與Vc接近，而還原力和清除超氧陰離子自由基的能力低于Vc。免疫活性研究主要通過(guò)對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響、T淋巴細(xì)胞增殖功能的影響和NK細(xì)胞毒活性的影響來(lái)測(cè)定，相對(duì)CPP-1而言