HMGB1中和抗體對心臟移植受者鼠抗感染能力的影響及機(jī)制.pdf

1、背景：
　　心臟移植后的病人因大量運(yùn)用免疫抑制劑（如他克莫司）會并發(fā)呼吸道感染等癥狀。我們的前期實(shí)驗(yàn)表明阻斷高遷移率族蛋白1（HMGB1）明顯延長了心臟移植物的存活。阻斷HMGB1除了可以改善心臟移植物，對心臟移植的受者呼吸道感染的免疫反應(yīng)的影響及潛在的作用機(jī)制尚未見報(bào)道。
　　目的：
　　研究HMGB1中和抗體在心臟移植受者鼠伴發(fā)的呼吸道poly(I:C)或LPS病原樣刺激中的作用及機(jī)制。
　　方法：
　

2、　1.心臟移植小鼠肺感染模型的制備：以C57BL/6小鼠為受者，BALB/c小鼠為供者建立同種異體間的腹部異位小鼠心臟移植模型。在移植后的第7天，受者鼠氣道給予poly(I:C)或LPS，分別刺激48h或24h來模擬病毒或細(xì)菌感染的急性期反應(yīng)。
　　2. HMGB1中和抗體的處理：抗HMGB1中和性單克隆抗體(小鼠來源)于移植當(dāng)天腹腔注射首次給予，隨后每兩天一次至術(shù)后第8天，每次200μg。相同量的小鼠來源的IgG處理作為同型對照

3、。同時(shí)部分受者小鼠每天腹腔注射1.0mg/kg的他克莫司治療作為實(shí)驗(yàn)對照。
　　3.相關(guān)的檢測方法與指標(biāo)：
　　（1）記錄HMGB1單克隆抗體處理后心臟移植物的生存曲線；
　?。?）ELISA、Western Blot方法檢測移植后肺局部HMGB1的表達(dá)變化；
　?。?）H&E染色檢測poly(I:C)或LPS刺激后移植小鼠肺局部炎性細(xì)胞浸潤；吉姆薩瑞士染色對肺泡灌洗液中的細(xì)胞進(jìn)行分類計(jì)數(shù)；ELISA檢測肺泡灌洗

4、液中炎性細(xì)胞因子如TNF-α，CXCL1等的水平；
　?。?）ELISA檢測poly(I:C)刺激后肺泡灌洗液中IFN-β的水平；
　?。?）流式細(xì)胞術(shù)檢測poly(I:C)刺激后的移植小鼠肺組織中T細(xì)胞反應(yīng)及其CD4+T、CD8+T細(xì)胞亞群，NK細(xì)胞及其亞群的變化；
　?。?）IgG包被的乳膠顆粒吞噬實(shí)驗(yàn)來檢測LPS刺激后的移植小鼠肺泡灌洗液中的巨噬細(xì)胞及中性粒細(xì)胞的吞噬功能。
　　結(jié)果：
　　1.成功建

5、立了小鼠腹腔異位心臟移植急性排斥反應(yīng)模型，在移植后第9天發(fā)現(xiàn)小鼠血清HMGB1處于很高的水平，肺泡灌洗液中的HMGB1也升高了，但肺部未見明顯的炎癥反應(yīng)。
　　2.移植后第7天受者鼠氣道給予poly(I:C)或LPS刺激后，肺泡灌洗液中的HMGB1升高更明顯，poly(I:C)或LPS引起的肺炎癥反應(yīng)明顯加重。
　　3.抗HMGB1中和抗體的處理，對心臟移植物及移植小鼠肺局部poly(I:C)刺激后的反應(yīng)的影響包括：

6、　?。?）對心臟移植物的影響：
　　抗HMGB1中和性單克隆抗體的處理，與對照IgG相比，明顯延長了心臟移植物的存活。未經(jīng)處理的移植小鼠，心臟移植物在移植后第7天左右停止跳動。
　?。?）對肺局部HMGB1的影響：
　　HMGB1中和抗體的處理，明顯降低了poly(I:C)刺激后移植小鼠肺泡灌洗液中HMGB1的水平。
　?。?）對poly(I:C)刺激后肺免疫反應(yīng)的影響：
　　HMGB1中和抗體的處理，減輕

7、了肺組織炎性細(xì)胞浸潤及病理評分，主要減少了中性粒細(xì)胞的數(shù)量，降低了促炎細(xì)胞因子如TNF-α、CXCL1的產(chǎn)生；HMGB1中和抗體的處理，降低了肺組織中CD4+T細(xì)胞的數(shù)量，降低了NK細(xì)胞的數(shù)量，但不影響CD8+T細(xì)胞的數(shù)量及活化，不影響CD11b+CD27+/CD11b+CD27-NK細(xì)胞亞群的分布，也不影響肺組織中IFN-β的產(chǎn)生。
　　4．抗HMGB1中和抗體的處理，對移植小鼠肺局部LPS刺激后的反應(yīng)的影響包括：
　　（

8、1）對肺局部HMGB1的影響：
　　HMGB1中和抗體的處理，明顯降低了LPS刺激后移植小鼠肺泡灌洗液中HMGB1的水平。
　?。?）對LPS刺激后肺免疫反應(yīng)的影響：
　　HMGB1中和抗體的處理，減輕了肺組織炎性細(xì)胞浸潤及病理評分，主要減少了中性粒細(xì)胞的數(shù)量，同時(shí)降低了促炎細(xì)胞因子TNF-α的產(chǎn)生；HMGB1中和抗體的處理，增強(qiáng)了肺泡灌洗液中巨噬細(xì)胞及中性粒細(xì)胞的吞噬能力。
　　結(jié)論：
　　1.小鼠心臟移

9、植對肺組織微環(huán)境有一定的潛在影響，如HMGB1的升高。
　　2.受者鼠肺局部給予poly(I:C)或LPS刺激，肺組織HMGB1升高更明顯，免疫反應(yīng)有加重。
　　3. HMGB1特異性中和抗體的處理，除了延長心臟移植物的存活，還可減輕受者鼠肺組織 poly(I:C)或 LPS刺激后的炎性損傷，同時(shí)不影響機(jī)體對 poly(I:C)或LPS免疫防御相關(guān)的反應(yīng)。
　　4.阻斷HMGB1（屬DAMP），移植受者對poly(I: