HMGB1參與小鼠心臟移植慢性排斥反應(yīng)的作用及其機(jī)制.pdf

1、背景：慢性排斥反應(yīng)及其所致的移植物血管病變是移植心臟失功的主要原因，目前分子機(jī)制尚有不明之處。高遷移率族蛋白1（HMGB1）作為一種炎性介質(zhì)，促進(jìn)急性排斥反應(yīng)的作用與機(jī)制已得到闡述，但在心臟移植慢性排斥反應(yīng)中的作用及潛在機(jī)制迄今尚未見報(bào)道。
　　目的：探究HMGB1在小鼠心臟移植慢性排斥反應(yīng)及移植物血管病變中的作用及細(xì)胞與分子機(jī)制。
　　方法：1.小鼠心臟移植慢性排斥反應(yīng)模型制備：以 C57BL/6小鼠為受體， B6.C-H

2、-2bm12KhEg小鼠為供體建立了MHC-II分子錯(cuò)配的小鼠心臟移植模型，可自發(fā)慢性排斥反應(yīng)。
　　2. HMGB1阻斷抗體干預(yù)：抗HMGB1單克隆抗體處理，手術(shù)前一天、移植后每周兩次給予受者腹腔注射，持續(xù)四周，每次200μg。小鼠IgG作為同型對(duì)照抗體。
　　3.檢測(cè)方法與指標(biāo)：
　?。?）免疫組化、免疫熒光檢測(cè)移植物的細(xì)胞浸潤(rùn)及HMGB1、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（TGF-β）的表達(dá)；
　?。?）H&E和EVG染色檢

3、測(cè)慢性排斥反應(yīng)和心臟移植物血管病變；
　　（3）RT-PCR、Western Blot檢測(cè)HMGB1及TGF-β的表達(dá)；
　?。?）ELISA檢測(cè)血清、組織勻漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清中相關(guān)細(xì)胞因子水平；
　?。?）流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)T細(xì)胞反應(yīng)、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、同種抗體含量、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞（DC）成熟及其亞群；
　　（6）單向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)檢測(cè)供者特異性同種T細(xì)胞應(yīng)答。
　　結(jié)果：1.成功建立了小鼠腹腔異位心臟移植

4、慢性排斥反應(yīng)模型，收獲的移植心臟標(biāo)本在組織形態(tài)學(xué)上反映了慢性排斥反應(yīng)、心臟移植物血管病變（CAV）和心肌纖維化發(fā)生、發(fā)展的過(guò)程。
　　2.HMGB1和TGF-β伴隨慢性排斥反應(yīng)的發(fā)展而表達(dá)增多，HMGB1特異性中和性單克隆抗體處理受者，可顯著改善心臟移植慢性排斥反應(yīng)介導(dǎo)的血管病變及移植物纖維化。
　　3.抗HMGB1單抗處理受者，對(duì)慢性排斥反應(yīng)相關(guān)的細(xì)胞與分子的影響包括：
　?。?）對(duì)固有免疫細(xì)胞的影響：
　　抗

5、HMGB1單抗處理顯著減低移植物和外周淋巴器官中巨噬細(xì)胞的比例及成熟DC的比例和數(shù)量，尤其是與炎癥性DC（Inf-DC）享有類似表型的CD11b+Ly6Chigh成熟DCs亞群。
　　體外實(shí)驗(yàn)表明在HMGB1或TGF-β1的單獨(dú)刺激下，小鼠骨髓來(lái)源樹突狀細(xì)胞（BMDC）表型成熟并向類似于Inf-DC亞群分化，同時(shí)HMGB1誘導(dǎo)成熟的DC亞群促使同種反應(yīng)性T細(xì)胞增殖及Th1/Th17反應(yīng)。
　?。?）對(duì)T細(xì)胞的影響：
　

6、　抗HMGB1單抗處理顯著降低受者針對(duì)供者的特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答如Th1/Th17反應(yīng)，升高調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的比例。
　?。?）對(duì)促炎因子的影響：
　　抗HMGB1單抗處理減少慢性排斥反應(yīng)過(guò)程中心臟移植物內(nèi)炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)及炎性相關(guān)細(xì)胞因子的產(chǎn)生如TNF-α、IL-1β、TGF-β。
　　（4）對(duì)促纖維化關(guān)鍵分子TGF-β的影響：
　　抗HMGB1單抗處理后TGF-β表達(dá)水平降低，體外實(shí)驗(yàn)證明HMGB1對(duì)TGF-β具有直

7、接促進(jìn)作用，可以誘導(dǎo)小鼠心臟單個(gè)核細(xì)胞直接分泌有活性的TGF-β。
　?。?）不影響供者特異性體液免疫應(yīng)答和補(bǔ)體反應(yīng)。
　　結(jié)論：1. HMGB1參與了小鼠心臟移植慢性排斥反應(yīng)和CAV的發(fā)展。其主要機(jī)制可能為：（1）促進(jìn)心臟移植物浸潤(rùn)的和受者脾臟中的DC成熟，促進(jìn)供者特異性的Th17及Th1應(yīng)答；（2）促進(jìn)炎癥細(xì)胞分泌TGF-β，進(jìn)一步增強(qiáng)炎癥反應(yīng)及組織損傷、修復(fù)。
　　2.HMGB1特異性中和性抗體可顯著改善心臟移植