HMGB1在大鼠DCD供體移植肝中的表達及意義.pdf

1、實驗目的：
　　肝移植手術過程中，肝臟缺血再灌注損傷是導致移植肝早期無功能及急、慢性排斥反應的重要原因。高遷移率族蛋白1(HMGB1)作為一種重要的炎癥因子，在肝臟缺血再灌注損傷中，它既可以由壞死細胞被動釋放，也可以由激活的巨噬細胞或單核細胞主動分泌到細胞外介導和參與許多炎癥反應。本實驗通過建立大鼠DCD原位肝移植模型，研究高遷移率族蛋白B1(HMGB1)在大鼠移植肝中的表達，初步探討HMGB1與相關受體信號轉導通路在肝臟缺血再灌

2、注損傷中的作用。
　　實驗方法：
　　DCD大鼠模型建立，采用剪破膈肌誘導氣胸并鉗夾心底部誘導心臟停跳法建立。DCD大鼠供體原位肝移植模型的建立，采用改良的Kamada雙袖套法行熱缺血20分鐘DCD供肝原位移植術。
　　將100只SPF級SD雄性大鼠隨機分為假手術組（20只）、正常移植組（供受體各20只）、DCD移植組（供受體各20只）。三組實驗動物術前均經(jīng)陰莖背靜脈行全身肝素化處理。假手術組、正常肝移植組和DCD肝移

3、植組按實驗設計要求于術后1h，2h，4h，6h，12h（每個時間點處理4只）取下腔靜脈血檢測血清ALT水平，處死動物后取肝臟組織標本，應用RT-PCR方法檢測HMGB1、TNF-a、IL-1 mRNA表達，應用Western Blot方法檢測HMGBⅠ蛋白表達情況及HE染色方法評估肝臟損傷程度，并進行統(tǒng)計學分析。
　　實驗結果：
　　1、HMGB1mRNA在肝臟組織中的表達
　　HMGB1mRNA水平均顯著高于假手術組

4、(P＜0.05)，其中DCD肝移植組高于正常肝移植組(P＜0.05)，其差異具有統(tǒng)計學意義。
　　2、HMGB1蛋白在肝臟組織中的表達
　　HMGB1蛋白水平均顯著高于假手術組(P＜0.05)，其中DCD肝移植組高于正常肝移植組(P＜0.05)，其差異具有統(tǒng)計學意義。
　　3、細胞因子TNF-a、IL-1mRNA在肝臟組織中的表達
　　TNF-a、IL-1水平均顯著高于假手術組(P＜0.05)，其中DCD肝移植組

5、高于正常肝移植組(P＜0.05)，其差異具有統(tǒng)計學意義。
　　4、肝功能檢測
　　實驗動物于術后1h、2h、4h、6h及12h取血清，檢測ALT水平。血清ALT水平，與假手術組相比，正常肝移植組和DCD組大鼠血清ALT水平在移植后1h、2h、4h、6h及12h均明顯升高(P＜0.05);與正常肝移植組相比，DCD組各時間點血清中ALT水平顯著升高(P＜0.05)。
　　5、各時間點肝臟的病理變化情況
　　肝移植再