HMGB1、RAGE、NF-KB在小鼠急性肝衰竭中表達(dá)的研究.pdf

1、目的：觀察D-氨基半乳糖(D-GaIN)及脂多糖(LPS)致小鼠急性肝衰竭發(fā)生過程中高遷移率族蛋白B1（HMGB1）、晚期糖基化終末產(chǎn)物受體（RAGE)、核轉(zhuǎn)錄因子（NF-KB）在小鼠肝臟的表達(dá)變化，探討HMGB1介導(dǎo)的RAGE/NF-KB信號(hào)通路在急性肝衰竭發(fā)病機(jī)制中可能的作用。
　　方法：雄性昆明種小鼠64只，隨機(jī)分為正常對(duì)照4小時(shí)、8小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)組，急性肝衰竭模型4小時(shí)、8小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)組。腹腔同時(shí)注射

2、D-Galn500mg/Kg、LPS10ug/Kg制備急性肝衰竭模型，分別在造模4小時(shí)、8小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)末處死小鼠，測(cè)定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總膽紅素（TBIL）的含量，觀察肝組織學(xué)改變，免疫組化SABC法檢測(cè)正常4小時(shí)、8小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)組及相應(yīng)肝衰竭組小鼠肝組織中HMGB1、RAGE、NF-KBp65的表達(dá)情況，并用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real time-PCR）的方法測(cè)定正常4小時(shí)、8小

3、時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)組及相應(yīng)肝衰竭組小鼠肝組織中HMGB1、RAGE、NF-KBp65的mRNA表達(dá)水平變化。
　　結(jié)果：急性肝衰竭模型組小鼠血清ALT和AST含量均顯著高于相應(yīng)正常對(duì)照組小鼠，且急性肝衰竭模型8小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)組小鼠血清TBIL含量顯著高于相應(yīng)正常對(duì)照。病理學(xué)觀察，急性肝衰竭4小時(shí)組小鼠肝臟肝細(xì)胞輕度腫脹、嗜酸性變、炎細(xì)胞浸潤(rùn),可見核內(nèi)包涵體，肝細(xì)胞呈點(diǎn)狀壞死，急性肝衰竭8小時(shí)組小鼠肝臟中肝細(xì)胞呈橋接壞

4、死，急性肝衰竭12小時(shí)組小鼠肝臟中肝細(xì)胞片狀壞死融合，核溶解、碎裂，匯管區(qū)及肝細(xì)胞間見較多炎細(xì)胞浸潤(rùn)伴少量出血，急性肝衰竭24小時(shí)組肝細(xì)胞壞死更加明顯，大片狀壞死和少量出血，僅少量肝細(xì)胞殘存，散在分布，纖維網(wǎng)狀支架塌陷。免疫組化顯示，急性肝衰竭模型組小鼠肝組織中HMGB1主要表達(dá)在肝細(xì)胞胞漿和肝細(xì)胞壞死區(qū)，HMGB1陽(yáng)性表達(dá)量較相應(yīng)正常對(duì)照組顯著增加，且隨肝衰竭發(fā)展表達(dá)明顯增加。急性肝衰竭模型組小鼠肝組織中RAGE主要表達(dá)在炎細(xì)胞浸潤(rùn)區(qū)

5、和肝細(xì)胞壞死區(qū)，RAGE陽(yáng)性表達(dá)量較相應(yīng)正常對(duì)照組顯著增加。急性肝衰竭模型組小鼠肝組織中NF-κBp65主要表達(dá)在炎細(xì)胞浸潤(rùn)區(qū)和肝細(xì)胞胞漿。NF-κBp65陽(yáng)性表達(dá)量較相應(yīng)正常對(duì)照組顯著增加，且隨肝衰竭發(fā)展明顯增加。Realtime-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，急性肝衰竭模型組小鼠肝組織HMGB1mRNA表達(dá)量顯著高于相應(yīng)正常對(duì)照組，且隨肝衰竭發(fā)展增加。急性肝衰竭模型組小鼠肝組織RAGEmRNA表達(dá)量顯著高于相應(yīng)正常對(duì)照組，且隨肝衰竭發(fā)展升高。