熱休克蛋白70在大鼠DCD移植肝中的表達(dá)及意義.pdf

1、研究背景及目的：
　　在人體，除了大腦之外，肝臟是另一個(gè)尚未完全被認(rèn)識的器官，其結(jié)構(gòu)非常細(xì)微，功能異常復(fù)雜，正因?yàn)槿绱耍S多疾病發(fā)生在肝臟，并且目前的眾多治療手段仍對一些肝臟疾病束手無策，如晚期肝硬化、先天性肝病、爆發(fā)性肝炎、肝癌等。肝移植的問世與發(fā)展無疑擴(kuò)展了肝臟治療的范疇及領(lǐng)域、推動(dòng)了肝臟外科技術(shù)的發(fā)展。隨著新的免疫抑制劑的問世、手術(shù)和監(jiān)護(hù)等技術(shù)的提高，肝移植取得了很大進(jìn)展，成為治療終末期肝病常規(guī)和有效方法。這意味著過去內(nèi)科無

2、法治療的一些先天性肝臟代謝性疾病和終末期肝病有望被治愈或使病人延長生命。然而由于各種因素導(dǎo)致的器官短缺是目前我國肝移植領(lǐng)域面臨的尷尬問題之一，心臟死亡后器官捐贈(DCD)為拓展器官來源有著重要意義，然而DCD肝臟器官存在熱缺血時(shí)間長，損傷大，器官質(zhì)量得不到保證等問題。
　　熱休克蛋白(Hsps)是一組主要存在于細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)高度保守的蛋白質(zhì)分子家族，具有抗炎、抗細(xì)胞凋亡和減輕過氧化作用，對移植器官保存和缺血再灌注損傷發(fā)揮自身保護(hù)作用，

3、其中Hsp70是含量最豐富、最主要、作用最突出的一類成員。Hsp70適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)可減輕炎癥反應(yīng)，減少細(xì)胞凋亡。穩(wěn)定蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，降低肝臟組織缺血再灌注損傷的程度。
　　本實(shí)驗(yàn)主要為測定Hsp70在大鼠肝移植不同階段的表達(dá)并探討缺血預(yù)處理對Hsp70表達(dá)及大鼠DCD移植肝的影響。
　　方法：
　　利用Kamada“二袖套法”為實(shí)驗(yàn)方法建立大鼠原位肝移植模型，將SD雄性大鼠隨機(jī)分為3組:1、假手術(shù)組(n=20);2、DCD肝移

4、植組(n=40，熱缺血時(shí)間為20min);3、缺血預(yù)處理(IP)肝移植組（n=40，進(jìn)行缺血預(yù)處理，即夾閉肝門15min后開放，關(guān)腹后24h行DCD移植，熱缺血時(shí)間為20min），分別取移植后2h、4h、6h、12h肝組織樣品及靜脈血，用組織病理切片H&E染色觀察肝移植再灌注后移植肝的損傷情況，檢測血清中ALT水平來評估移植肝肝功能，采用熒光定量RT-PCR檢測移植物中Hsp70mRNA轉(zhuǎn)錄水平及Western-blot法測定Hsp70

5、蛋白表達(dá)情況，對比缺血預(yù)處理組和DCD肝移植組各時(shí)間點(diǎn)大鼠肝臟組織Hsp70的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、移植后肝組織病理觀察:肝移植再灌注后肝臟小葉結(jié)構(gòu)開始破壞，出現(xiàn)出血、炎性細(xì)胞浸潤、水腫、脂肪變性、細(xì)胞皺縮核分裂甚至壞死、凋亡。且隨著時(shí)間推移（2h-12h），肝臟損傷顯著增加。缺血預(yù)處理組肝移植后肝臟損傷在各時(shí)間點(diǎn)較DCD肝移植組損傷延后且程度更輕。
　　2、肝移植再灌注后血清ALT水平，與假手術(shù)組相比，缺血預(yù)處

6、理組、DCD組和正常肝移植組大鼠血清ALT水平在移植后、2h、4h、6h及12h均明顯升高(P＜0.05)且呈遞增趨勢;與缺血預(yù)處理組相比，DCD肝移植組各時(shí)間點(diǎn)血清中ALT水平顯著升高(P＜0.05);與DCD肝移植組各時(shí)間點(diǎn)血清中ALT水平相比顯著升高(P＜0.05)。
　　3、Hsp70 mRNA轉(zhuǎn)錄在肝移植大鼠中較假手術(shù)組明顯增加(P＜0.05)，且缺血預(yù)處理組較DCD肝移植組轉(zhuǎn)錄顯著增加(P＜0.05)。
　　4、