重組HMGB1對(duì)DEN2感染Ana-1細(xì)胞分泌TNF-α及NO的影響.pdf

1、目的:觀察不同濃度重組高遷移率族蛋白1(recombinationhighmobilitygroupboxprotein1,rHMGB1)對(duì)DEN2感染鼠源單核巨噬細(xì)胞Ana-1產(chǎn)生TNF-α和NO的影響。
　　方法:直接免疫熒光及RT-PCR鑒定DEN2感染Ana-1細(xì)胞;Real-timePCR動(dòng)態(tài)監(jiān)測DEN2感染Ana-1細(xì)胞后胞內(nèi)病毒增殖情況;DEN2感染Ana-1細(xì)胞后,與不同濃度重組HMGB1進(jìn)行培養(yǎng),Real-tim

2、ePCR檢測24h時(shí)間點(diǎn)感染組及不同濃度重組HMGB1組中病毒載量情況;以雙抗體夾心ELISA方法檢測各組上清液中TNF-α的分泌水平;以Griess試劑檢測各組上清液中NO含量。
　　結(jié)果:
　　1.DEN2感染Ana-1后,直接免疫熒光檢測到DEN2并且RT-PCR檢測到病毒的目的基因NS5,條帶大小為177bp,證實(shí)DEN2可以感染Ana-1細(xì)胞。
　　2.Real-timePCR動(dòng)態(tài)監(jiān)測DEN2感染Ana-1胞

3、內(nèi)病毒載量,在24h病毒載量達(dá)高峰,48h病毒載量水平顯著下降,2-△△Ct值分別為50241.67±9570.96,71.67±23.67,差異具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。DEN2NS5引物的熔解曲線波峰單一,峰形銳利。
　　3.Real-timePCR檢測不同濃度重組HMGB1處理組的病毒載量,與DEN2組相比,D-HMGB1(即DEN2-HMGB1)處理組病毒載量明顯下降,D-HMGB1-1組(HMGB1處理濃度為

4、1ng/ml)﹑D-HMGB1-10組(HMGB1處理濃度為10ng/ml)﹑D-HMGB1-100組(HMGB1處理濃度為100ng/ml)和D-HMGB1-1000組(HMGB1處理濃度為1000ng/ml)抑制率(％)分別為41.53±2.12﹑55.30±1.59﹑74.75±1.12﹑86.35±1.42,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。隨rHMGB1處理濃度增加,對(duì)胞內(nèi)病毒增殖的抑制率增大。
　　4.雙抗體夾心ELI

5、SA法檢測TNF-α濃度,與DEN2組比較,D-HMGB1組TNF-α濃度有所下降,且rHMGB1濃度越大,TNF-α濃度下降越明顯,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　5.Griess試劑檢測NO含量,rHMGB1作用后NO濃度明顯減少,與DEN2組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.在體外DEN2可以感染Ana-1細(xì)胞;
　　2.重組HMGB1對(duì)DEN2在Ana-1胞內(nèi)的復(fù)制,有