DENV-2感染小鼠ANA-1巨噬細(xì)胞補(bǔ)體mRNA動(dòng)態(tài)和細(xì)胞極化的初探.pdf

1、目的：探討DENV-2對(duì)小鼠ANA-1巨噬細(xì)胞胞內(nèi)補(bǔ)體相關(guān)組分mRNA和細(xì)胞極化動(dòng)態(tài)的影響。
　　方法:用C6/36細(xì)胞增殖DENV-2，RT-PCR鑒定病毒，TCID50滴定病毒效價(jià)。分別以LPS/IL-4體外刺激小鼠ANA-1細(xì)胞3h、8h、12h及24h，Real-time PCR法檢測(cè)IL-1β、CCL2、Arg-1細(xì)胞極化指標(biāo)的變化，檢測(cè)胞內(nèi)C3、CfB、CRIg、C1q補(bǔ)體成分mRNA的動(dòng)態(tài)。用DENV-2感染M0/M

2、2極化的ANA-1巨噬細(xì)胞，Real-time PCR檢測(cè)細(xì)胞的極化指標(biāo)、NS1基因和Mavs抗病毒基因的表達(dá)，以及胞內(nèi)補(bǔ)體C3、CRIg、C1q mRNA的動(dòng)態(tài)。
　　結(jié)果：
　　1）細(xì)胞極化后補(bǔ)體mRNA動(dòng)態(tài)：刺激3h后LPS組IL-1β、CCL2 mRNA表達(dá)上調(diào)，12h達(dá)高峰；IL-4組中以Arg-1 mRNA表達(dá)上調(diào)顯著，于24h達(dá)高峰，提示LPS組細(xì)胞向M1方向極化，IL-4組向M2方向極化。兩極化組的相應(yīng)補(bǔ)體組

3、分均表現(xiàn)為不同程度的上調(diào)，其中：①C1q、C3在ANA-1向M2極化8h后上調(diào)顯著，12h時(shí)達(dá)高峰（2-ΔΔct分別為94.9±12.9和11.3±2.4）；②CfB因子在M1極化組中上調(diào)顯著，12h表達(dá)上調(diào)達(dá)高峰（2-ΔΔct為61.4±6.2）；③CRIg在兩組中均在24h時(shí)表達(dá)上調(diào)且具有顯著性差異（P<0.05）。
　　2）DENV-2感染M0/M2狀態(tài)的ANA-1細(xì)胞后補(bǔ)體mRNA動(dòng)態(tài)：①感染后C1q mRNA表達(dá)均受抑制

4、，且M2感染組比M0感染組C1q表達(dá)均較高（差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義）；②3h時(shí)M2感染組C3 mRNA表達(dá)受抑制，12h時(shí)上調(diào)2-ΔΔct為5.08±2.25。與M0感染組相比，12h和24h時(shí)兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；③除12h檢測(cè)點(diǎn)外，DENV-2感染后CRIg表達(dá)均上調(diào)或在正常水平。④DENV-2感染后M2細(xì)胞CfB基因表達(dá)均被下調(diào)，但與感染 M0組比較兩組無明顯差異。
　　3）DENV-2感染后M0/M2狀態(tài)的ANA-1細(xì)胞后細(xì)

5、胞極化的動(dòng)態(tài): DENV-2感染M0細(xì)胞后IL-1β、CCL2和Arg-1表達(dá)均受抑制，Arg-1基因于24h時(shí)恢復(fù)正常。DENV感染逆轉(zhuǎn)M2細(xì)胞Arg-1基因的表達(dá)。
　　4）感染后胞內(nèi)NS1、Mavs mRNA的動(dòng)態(tài)：24h內(nèi)各感染組間NS1和Mavs基因的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1）不同極化ANA-1細(xì)胞表達(dá)補(bǔ)體成分mRNA不同：M1極化細(xì)胞較高表達(dá)CfB，M2極化細(xì)胞高表達(dá)C1q、C3和CRIg