褶紋冠蚌HMGB1和組蛋白抗菌肽的表達(dá)及HMGB1的致炎功能.pdf

1、褶紋冠蚌(Cristaria plicata)分布廣泛,是我國(guó)重要的淡水育珠蚌之一,具有一定的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
　　 高遷移率族蛋白B1(high mobility group box1,HMGB1)是一種細(xì)胞核的蛋白,在細(xì)胞內(nèi)有多種作用。本文利用RT-PCR,克隆出褶紋冠蚌HMGB1cDNA全長(zhǎng)。褶紋冠蚌HMGB1cDNA全長(zhǎng)621bp,編碼207個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)編碼的蛋白分子量大小為24Kda,預(yù)測(cè)等電點(diǎn)PI=5.7。本文還將基因擴(kuò)

2、增產(chǎn)物和表達(dá)載體pET-30a經(jīng)KpnI、EcoRI雙酶切之后,連接并構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒,將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌Rosetta-gami(DE3)中,OD600=0.65時(shí)加入IPTG至終濃度為1mmol/L,37℃誘導(dǎo)12h,得到大量可溶性蛋白,用Ni2+親和層析鎳柱純化,最終得到較純的目的蛋白。通過(guò)向SD小鼠注射rCpHMGB1,使SD小鼠血清中的TNF-α含量出現(xiàn)明顯上升,在4h處出現(xiàn)峰值,并隨著rCpHMGB1濃度的上升,TNF-

3、α的濃度上升。說(shuō)明了重組的褶紋冠蚌rHMGB1具有使小鼠致炎的能力。
　　 組蛋白H2A(HistoneH2A)是一種富含賴氨酸的組蛋白。本文利用RT-PCR等分子生物學(xué)技術(shù),克隆出褶紋冠蚌組蛋白H2AN末端多肽cDNA。其全長(zhǎng)120bp,編碼39個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)編碼的蛋白分子量大小為4.0KDa,預(yù)測(cè)等電點(diǎn)PI=12.3。本文將基因擴(kuò)增產(chǎn)物和表達(dá)載體pET-30a和pET-32a經(jīng)KpnI、EcoRI雙酶切之后,連接并構(gòu)建重組表