DDAH-2(-449G-C)基因多態(tài)性對維持性血液透析患者血清ADMA濃度的影響.pdf

1、目的：本研究以維持性血液透析(Maintenance Hemodialysis，MHD)患者作為研究對象，分別通過基因測序、高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用等方法測定患者二甲基精氨酸二甲胺水解酶2(dimethylargininedimethylaminohydrolase2，DDAH-2)基因多態(tài)性以及血清非對稱性二甲基精氨酸(asymmetric dimethylarginine，ADMA)的濃度，探討DDAH-2(-449G/C)單核苷酸基

2、因多態(tài)性對血清ADMA濃度的影響，為MHD患者中心血管疾病(cardiovascular disease CVD)高發(fā)病率原因的研究提供一種基礎(chǔ)理論依據(jù)。
　　方法：選擇河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院血液透析中心MHD患者共126例作為研究對象，記錄患者臨床及實驗室資料。入選標(biāo)準(zhǔn)：①透齡≥6個月；②每周透析2～3次，每次4～4.5小時；③近1月無急性感染、創(chuàng)傷及其他活動性疾病；④近2周未使用降脂藥物及抗氧化劑的患者；⑤近3個月重組人促紅細胞

3、生成素用法和用量不變；⑥自愿參加本課題研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在嚴(yán)重的肝功能損害；②自身免疫性疾病活動期；③嚴(yán)重營養(yǎng)不良。原發(fā)病診斷包括：慢性腎小球腎炎45例，糖尿病腎病22例，高血壓腎損害13例，常染色體顯性遺傳性多囊腎10例，馬兜鈴酸腎病5例，慢性腎盂腎炎3例，梗阻性腎病3例，其他7例，不明原因所致的腎功能衰竭18例。所有研究對象使用超純水透析，應(yīng)用碳酸氫鹽透析液，透析液配方：Na+濃度140mmol/L，K+濃度2.0或3.0mmol

4、/L，Ca2+濃度1.25或1.5mmol/L；透析液溫度36～36.5℃；透析液流量500 ml/min；血流速200～300ml/min；所用透析器為FX·80血濾器，膜材料為聚砜膜。于上機前取2ml靜脈血，經(jīng)離心后收集血清于-80℃冰箱保存，用于血清ADMA濃度的檢測。另取2ml靜脈血用于DNA的提取。應(yīng)用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測定研究對象血清ADMA濃度；應(yīng)用基因組DNA提取試劑盒提取研究對象DNA，提取的DNA于-80℃冰箱

5、保存?zhèn)溆?；運用Snapshot基因測序法確定DDAH-2(-449G/C)單核苷酸基因多態(tài)性。采用SPSS13.0軟件包進行統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)分析，計量資料結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示，兩組之間的比較采用獨立樣本t檢驗，多組之間比較采用方差分析，單因素分析采用線性相關(guān)分析，多因素分析用多元線性回歸分析，以P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1以性別分組，將研究對象分為男性組及女性組，其中男性組62例，女性組64例。血

6、清ADMA濃度分別為175.44±60.08ng/ml、186.99±61.77ng/ml，對其進行統(tǒng)計學(xué)分析，兩組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　2按吸煙情況將研究對象分為吸煙組、戒煙組及不吸煙組。吸煙組18例，戒煙組33例，不吸煙組75例。血清ADMA濃度分別為158.87±65.30ng/ml、185.74±63.69ng/ml、184.74±58.34ng/ml，三組之間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。<

7、br>　　3按研究對象糖尿病史分組，將研究對象分為糖尿病組及非糖尿病組。糖尿病組26例，非糖尿病組100例。血清ADMA濃度分別為178.15±62.37ng/ml、193.46±54.72ng/ml，兩組之間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　4按研究對象血壓水平進行分組，以收縮壓≥140mmHg或舒張壓≥90mmHg為標(biāo)準(zhǔn)將研究對象分為血壓升高組及血壓正常組。血壓升高組87例，血壓正常組39例。血清ADMA濃度分別為1

8、95.69±60.92ng/ml、149.22±47.98ng/ml，兩組之間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　5對研究對象年齡、體重指數(shù)、透齡、透前收縮壓、舒張壓、血紅蛋白濃度、C-反應(yīng)蛋白水平、血清甘油三酯濃度、總膽固醇濃度、低密度脂蛋白濃度以及高密度脂蛋白濃度與血清ADMA濃度的關(guān)系進行直線相關(guān)分析，得出體重指數(shù)、透前舒張壓、血紅蛋白濃度、C-反應(yīng)蛋白水平、血清甘油三酯濃度、低密度脂蛋白濃度、高密度脂蛋白濃度與血清

9、ADMA濃度無明顯相關(guān)性；年齡與血清ADMA濃度呈正相關(guān)，Spearman相關(guān)系數(shù)r=0.191，P=0.033；透齡與血清ADMA濃度呈相正關(guān)，Spearman相關(guān)系數(shù)r=0.296，P=0.01；透前收縮壓血清ADMA濃度呈正相關(guān)，Spearman相關(guān)系數(shù)r=0.564，P＜0.001；血清總膽固醇濃度與血清ADMA濃度呈正相關(guān)，Spearman相關(guān)系數(shù)r=0.396，P＜0.001。
　　6 DDAH-2(-449G/C)基

10、因型分布：GG32(25％)，CG71(57％)，CC23(18％)；G等位基因頻率為53.6％，C等位基因頻率為46.4％。DDAH-2(-449G/C)基因型分布符合Hardy-WeinBerg平衡(X2=2.22，P=0.136)。在DDAH-2(-449 C/G)基因型為GG、CG、CC時，血清ADMA濃度分別為168.43±52.39ng/ml、185.78±61.94ng/ml、185.42±68.77ng/ml，三組之間比

11、較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　7將上述單因素分析中與血清ADMA濃度具有統(tǒng)計學(xué)意義的相關(guān)指標(biāo)進行多元線性回歸分析(逐步回歸分析法αλ=0.05，α出=0.10)，得出多元線性回歸方程為：Y=-92.614±0.355X透齡+1.437X收縮壓+12.371X總膽固醇(復(fù)相關(guān)系數(shù)R=0.596，P＜0.05)結(jié)果表明：透齡、透前收縮壓及血清總膽固醇濃度與血清ADMA濃度存在線性回歸關(guān)系。
　　結(jié)論：
　　1在