lncRNA--M1ANCR在雞原始生殖細(xì)胞形成過(guò)程中的作用機(jī)制探究.pdf

1、分類號(hào)UDC堂密埸H1大萼YANGZHOUUNIVERSITY碩士學(xué)位論文號(hào)M!Q互2壘級(jí)——(學(xué)術(shù)型)lncRNA—M1ANCR在雞原始生殖細(xì)胞形成過(guò)程中的作用機(jī)制探究‘汪怡臨指導(dǎo)教師姓名：李莖盔教授：揚(yáng)州大堂，江蘇揚(yáng)州I，225009趙文明教授，揚(yáng)州大鱟，江蘇揚(yáng)州，225009申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：亟學(xué)科專業(yè)名稱：邈塹壅堡直鱟魚鳘墮論文提交日期：2018年6月10目論文答辯日期：2018生5月26日學(xué)位授予單位：塹州一盤堂學(xué)位授予日期：20

2、18生6月30日答辯委員會(huì)主席：鄞錫杰教授：江蘇科技大鱟2018年6月汪怡臨IncRNA—M1ANCR在雞原始生殖細(xì)胞形成過(guò)程中的功能與調(diào)控機(jī)制探究1IncRNAM1ANCR在雞原始生殖細(xì)胞形成過(guò)程中作用機(jī)制探究研究生：汪怡臨導(dǎo)師：李碧春教授趙文明教授專業(yè)：動(dòng)物遺傳育種與繁殖(揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，揚(yáng)州225009)手閏要原始生殖細(xì)胞(primordialgermcell，PGCs)作為配子的祖先細(xì)胞，是生殖細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中必不可少

3、的。研究PGCs的發(fā)生和分化機(jī)理對(duì)動(dòng)物種質(zhì)資源保存、創(chuàng)新利用以及基因修飾雞的生產(chǎn)等領(lǐng)域具有重要理論和實(shí)踐意義。PGCs的發(fā)生受到許多因素的影響。目前，研究者們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)一些關(guān)鍵性的基因、信號(hào)通路、生長(zhǎng)因子和表觀遺傳修飾因素對(duì)PGCs的發(fā)生起重要調(diào)控作用。盡管這些因素對(duì)于PGCs形成起到了一定的促進(jìn)作用，但體外誘導(dǎo)PGCs的生成效率并沒(méi)有得到提高。因此，亟需從新的領(lǐng)域?qū)GCs的生成機(jī)制進(jìn)行創(chuàng)新性地探究，深入了解和認(rèn)識(shí)PGCs的形成過(guò)程，以

4、期獲取能夠滿足生產(chǎn)研究所需的大量PGCs細(xì)胞。隨著測(cè)序技術(shù)和生物信息分析技術(shù)的發(fā)展，長(zhǎng)鏈非編碼RNA(Longnon—codingRNA，lncRNA)在生殖細(xì)胞分化與胚胎發(fā)育過(guò)程中的作用逐漸受到重視。研究lncRNA對(duì)PGCs發(fā)生的影響及機(jī)制，能夠?yàn)樘岣逷GCs體外生成效率提供新的研究策略。本研究基于前期單細(xì)胞高通量測(cè)序結(jié)果篩選得到雞PGCs特異表達(dá)lncRNA—M1ANCR，利用RNA干擾技術(shù)，以家雞為研究對(duì)象，從體內(nèi)和體外兩個(gè)水平

5、探究了lncRNAM1ANCR在PGCs發(fā)生過(guò)程中的功能和機(jī)制，為有效提高PGCs效率提供理論依據(jù)和參考。研究結(jié)果如下：(1)IncRNA—MIANCR的全長(zhǎng)擴(kuò)增，細(xì)胞定位與編碼能力鑒定：基于前期高通量測(cè)序篩選得到PGCs特異性表達(dá)lncRNA，命名為lncRNA—M1ANCR，通過(guò)RACE實(shí)驗(yàn)擴(kuò)增獲得lncRNA—M1ANCR全長(zhǎng)(共計(jì)1115bp)，qRTPCR驗(yàn)證了lncRNA在PGCs中特異性高表達(dá)(ESCs：1021士0231

6、，PGCs：5131士123，SSCs：1825士0828)，與轉(zhuǎn)錄組測(cè)序(ESCs：1143士0350，PGCs：3713141053，SSCs：68250923)結(jié)果一致，細(xì)胞定位監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)lncRNA—M1ANCR定位于PGCs細(xì)胞質(zhì)中(細(xì)胞核：077340051，細(xì)胞質(zhì)：3395土0583)；生物信息學(xué)預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)lncRNAM1ANCR的4bp一115bp為開(kāi)放閱讀框序列，構(gòu)建原核融合表達(dá)載體發(fā)現(xiàn)該序列在BL菌種中不表達(dá)蛋白，表明明