2010～2015年杭州地區(qū)人H3N2病毒流行病學(xué)及亞型特性分析.pdf

1、目的:H3N2型流感病毒常不定期的引起不同程度的爆發(fā)流行，因該病毒的高變異性，目前的疫苗株對(duì)已發(fā)生抗原突變的病毒株不能產(chǎn)生有效的保護(hù)。通過對(duì)2010～2015年杭州地區(qū)甲型流感H3N2進(jìn)行分子流行病學(xué)調(diào)查，實(shí)現(xiàn)對(duì)該病毒菌株的分子變化進(jìn)行監(jiān)測(cè)，并為疾病的防控提供可靠的科學(xué)證據(jù)。
　　方法:
　　1.2010年1月至2015年9月浙江大學(xué)附屬第一醫(yī)院流感監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)相關(guān)數(shù)據(jù)，各年度流感樣病例分別為:2406例、995例、766例、1

2、156例、1928例和404例。分別采用研究試劑所有病例的咽拭子均分離到H3N2流感病毒，并經(jīng)過血凝抑制實(shí)驗(yàn)和流感病毒核酸監(jiān)測(cè)證實(shí)。
　　2.參考A/New York/392/2004(H3N2)毒株，設(shè)計(jì)擴(kuò)增H3N2各個(gè)片段的全編碼區(qū)序列引物，通過PCR的方法對(duì)疑似患者進(jìn)行擴(kuò)增測(cè)序;
　　3.序列收集:所有H3N2的HA(hemagglutinin)與NA(neuraminidase)基因完整序列均在GISAID及NCBI

3、上搜索查找獲取。在GISAID數(shù)據(jù)庫上搜索關(guān)鍵詞分別為:“H3N2”，“Asia”，“China”，“Hangzhou”，“HA”;或“H3N2”，“Europe”，“Switzerland”,“HA”;“H3N2”,“North America”,“United States”,“texas”,“HA”;“H3N2”，“Oceania”，“Australia”，“Victoria”，“HA”;在NCBI數(shù)據(jù)庫中的“Nucleotide

4、”中搜索“H3N2”，“HA”，“NA”，并查找“hangzhou”;
　　4.HA與NA基因序列篩選與比對(duì):依據(jù)病毒的分離地、時(shí)間、宿主為前提條件進(jìn)行整合，條件相同序列只取一條。H3N2基因序列按照地區(qū)分為杭州及WHO推薦的2013/2015年流行疫苗株A/TEXAs/50/2012(H3N2)、2013/2014年流感疫苗株A/Victoria/361/2011和2015/2016疫苗株A/Switzerland/971529

5、3/2013 E53作為參考毒株的HA和NA兩組。分組的序列分別用軟件Clustal X(v1.8)進(jìn)行比對(duì)、分析、剪切對(duì)齊。序列比對(duì)完成后，直接運(yùn)用Mega(v5.2)軟件，采用Neighbor-joing法進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化樹分析。用FigTree軟件對(duì)圖形進(jìn)行編輯。
　　結(jié)果:
　　1.2010～2015年杭州地區(qū)H3N2亞型的核酸陽性人數(shù)分別為73、42、40、33、62、30，H3N2亞型核酸陽性率分別為3.03％、4.

6、22％、5.67％、2.85％、3.77％、4.34％。
　　2.2010～2015年杭州地區(qū)H3N2感染率分析，不同年度間H3N2感染率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=26.266，P＜0.05)，不同性別和年齡組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=7.168，x2=12.954,P＞0.05)。
　　3.2015年HA序列分析結(jié)果表明，該年度沒有形成新的病毒。
　　4.通過對(duì)2010～2013年的NA序列進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)該序列高度保

7、守。
　　結(jié)論:2010～2015年杭州甲型流感病毒(H3N2)占流感總陽性的46.9％，且絕大多數(shù)的病毒株屬于3C組。每年的冬春季節(jié)為杭州市H3N2流感流行期。由于3c.2和3c.3a病毒株間很少有抗原交叉，因此分支3c.3a中疫苗株A/Switzerland/9715293/2013參考株可能無法提供針對(duì)流行組3c.2病毒所需的保護(hù)。
　　2015年1月～9月病毒株研究結(jié)果顯示，2015年分離株抗原決定簇在A區(qū)和B區(qū)有多

8、個(gè)位點(diǎn)發(fā)生了變異，雖未形成新的亞型，但其他位點(diǎn)的變異正在加強(qiáng)。
　　本文對(duì)2010年～2013年杭州H3N2亞型流感病毒NA基因的序列進(jìn)行測(cè)定，該基因的進(jìn)化路徑主要是以一進(jìn)化主干伴隨著多側(cè)支的方式進(jìn)化。但2012～2013年的毒株在進(jìn)化樹上沒有循序漸進(jìn)的過程，進(jìn)化呈現(xiàn)跳躍的方式，同一年代毒株可分為幾個(gè)分支同時(shí)存在，這些分支在進(jìn)化樹上的位置有高有低，進(jìn)化中由于免疫壓力和病毒自身進(jìn)化因素的影響，某些分支會(huì)成為進(jìn)化的主流。以往研究表明，