豬圓環(huán)病毒2型分子流行病學(xué)調(diào)查.pdf

1、豬圓環(huán)病毒2型(Porcinecircovurustype2,PCV2)是引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征等相關(guān)疾病的重要病原。本研究應(yīng)用復(fù)合PCK方法對(duì)紅蘇地區(qū)162份可疑病料進(jìn)行了PCV1和PCV2檢測(cè)，并對(duì)18頭PCV2陽(yáng)性豬病料的心、肝、脾、肺、腎、腦、腹股溝淋巴結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)、扁桃體進(jìn)行了檢測(cè)。在患呼吸道疾病發(fā)病豬的肺泡巨噬細(xì)胞CPAM)中檢測(cè)到了PRRSV和PCV2，完成了5株P(guān)CV2分離毒株的全基因組序列測(cè)定與分析。＠＠1、

2、應(yīng)用復(fù)合PCR方法，對(duì)江蘇地區(qū)的162份可疑病料進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果72份病料為PCV2陽(yáng)性，17份為PCV1陽(yáng)性，其中7份同時(shí)感染PCV1,PCV2。從發(fā)病時(shí)間看，以9月至11月發(fā)病最多，陽(yáng)性率高達(dá)54.67％。樣品較多的保育豬和育肥豬的陽(yáng)性率分別是26.03％和68.12％。通過流行病學(xué)調(diào)查，表明該病已在江蘇地區(qū)呈流行趨勢(shì)。 2.應(yīng)用復(fù)合PCIt方法，對(duì)18頭PCV2陽(yáng)性豬病料的心、肝、脾、肺、腎、腦、腹股溝淋巴結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)

3、、扁桃體進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果有7頭PCV2陽(yáng)性豬的各個(gè)臟器都能檢測(cè)出PCV2;在這些臟器中，肺、腹股溝淋巴結(jié)、扁桃體的檢出率都為100％，較其它受檢臟器更適合作為PCV2的檢測(cè)樣品。 3、對(duì)66份2004年l0月至2005年8月患呼吸道疾病發(fā)病豬的肺組織進(jìn)行PBS灌洗處理，獲得肺泡巨噬細(xì)胞(PAM)，用PAM抹片，應(yīng)用間接免疫熒光試驗(yàn)（IIF）檢測(cè)豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）:同時(shí)提取PAMDNA作為模板，應(yīng)用PCR方法檢測(cè)豬

4、圓環(huán)病毒2型。結(jié)果在66份PAM中，26份PRRSV陽(yáng)性，23份PCV2陽(yáng)性，其中8份同時(shí)檢測(cè)出PRRSV和PCV2。以上結(jié)果表明，豬群中PRRSV和PCV2感染率都比較高，混合感染占有一定比例;應(yīng)用IIF和PCR方法可以在PAM中檢側(cè)PRRSV和PCV2。 4、利用Dulac細(xì)胞從臨床樣品中分離到5株P(guān)CV2，分別命名為Jiangsu-HA,Jiangsu-JD,Jiangsu-TZ,Jiangsu-YX,Zhejiang-J

5、X。用PCR方法擴(kuò)增出5株分離毒株的全基因組，并將擴(kuò)增片段克隆于pGEM-Teasy載體里，經(jīng)藍(lán)白斑和氨節(jié)青霉素抗性篩選及EcoRI酶切鑒定，獲得5個(gè)含有不同PCV2全基因組擴(kuò)增片段的陽(yáng)性重組質(zhì)粒。對(duì)質(zhì)粒中的插入片段進(jìn)行序列測(cè)定表明，所擴(kuò)增的片段長(zhǎng)度均為1767bp，與相關(guān)報(bào)道相符。應(yīng)用DNAStar序列分析軟件，對(duì)側(cè)定的5個(gè)PCV2分離株全基因組序列與Genbank中PCV毒株進(jìn)行同源性比較并繪制系統(tǒng)發(fā)生樹，結(jié)果表明，受試的5個(gè)PCV