安徽省豬圓環(huán)病毒病分子流行病學(xué)調(diào)查.pdf

1、豬圓環(huán)病毒病是由豬圓環(huán)病毒Ⅱ(PCV2)引起的豬的一種多個(gè)系統(tǒng)功能障礙的病毒性傳染病。臨床上以新生仔豬先天性腦震顫和斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征等為主要特征。豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征(postweaningmultisystemicwastingsyndrome.PMWS)的病原體現(xiàn)已經(jīng)被確認(rèn)為豬圓環(huán)病毒(PCV2)，除了引發(fā)PMWS外，PCV2還與豬皮炎腎病綜合征(porcinedermatitisandnephropathysyndro

2、me.PDNS)、新生仔豬先天性腦震顫(Congenitaltremors.CT)、增生性壞死性肺炎(proliferativeandnecrotizingpneumonia.PNP)以及懷孕母豬的繁殖障礙(reproductivedisorders)等病的發(fā)生有關(guān)，它已給世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，因此了解目前國(guó)內(nèi)豬圓環(huán)病毒的感染情況，對(duì)于我們進(jìn)行預(yù)防、治療，乃至疾病的研究至關(guān)重要。本研究根據(jù)安徽省的地理分布和養(yǎng)殖狀況，從安徽不同

3、地區(qū)采集豬組織器官樣品進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查。 1.根據(jù)Genbank上已經(jīng)發(fā)表的PCV2基因序列，選取其保守性高的ORF2在其內(nèi)部設(shè)計(jì)一對(duì)引物(可擴(kuò)增片段630bp的序列)，對(duì)兩株P(guān)CV2參考毒株進(jìn)行PCR的檢測(cè)，均能擴(kuò)增出630bp的目的基因片段，而對(duì)PCV1、豬瘟病毒、雞傳染性貧血病毒均沒有擴(kuò)增出特異性目的條帶。將PCV2參考毒株作不同倍數(shù)稀釋后分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增，當(dāng)稀釋至100倍，即5fg病毒的DNA含量時(shí)，仍可以擴(kuò)增出特異性

4、片段。應(yīng)用本試驗(yàn)方法對(duì)采集于宿州、懷寧、阜陽、合肥四個(gè)地區(qū)的屠宰場(chǎng)生豬的脾、肺、腎、淋巴結(jié)各30份以及采集于華杰、舒城長(zhǎng)風(fēng)、巢湖雄業(yè)3個(gè)豬場(chǎng)的發(fā)病豬的脾、肺、腎、淋巴結(jié)各10份進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明：(1)不同地區(qū)屠宰場(chǎng)的生豬均有豬圓環(huán)病毒Ⅱ感染，其中，宿州、合肥檢出率為6.1％，阜陽的檢出率為10％，而懷寧的檢出率為23.3％。(2)對(duì)3個(gè)豬場(chǎng)發(fā)病豬的調(diào)查表明：舒城長(zhǎng)風(fēng)種豬場(chǎng)和巢湖雄業(yè)食品有限公司種豬場(chǎng)病豬的檢出率均為20％，而華杰良種畜

5、禽有限公司的檢出率為70％。 2.為了了解病毒的感染組織器官的帶毒狀況；分別對(duì)上述已檢測(cè)為陽性的樣品進(jìn)行不同部位的檢測(cè)；檢測(cè)的部位包括脾、肺、腎、淋巴結(jié)等。結(jié)果顯示不同部位均有陽性目的片段的檢出，但不同部位的檢出率不同。其中在檢測(cè)的20份樣品中，脾和淋巴結(jié)檢出率均為100％，肺檢出率為80％，腎的檢出率為40％。從而表明病毒主要侵害免疫器官，這可能是造成豬免疫機(jī)能降低的原因。 3.為了比較安徽地區(qū)檢出的PCV2與國(guó)內(nèi)外其

6、它毒株的親緣關(guān)系，對(duì)所檢出的部分陽性樣品進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并對(duì)其進(jìn)行序列測(cè)定和序列比較分析。通過序列測(cè)定表明本試驗(yàn)中的四個(gè)樣品PCR產(chǎn)物的序列與GenBank上登陸的PCV2序列的同源性達(dá)90％以上，證明是PCV2。從系統(tǒng)發(fā)育樹上可以看出：四個(gè)陽性樣品之間的親緣關(guān)系密切，它們組成的分支和一株英國(guó)毒株AY484416，共同組成另一個(gè)細(xì)小分支；同時(shí)這一分支又和DQ195679及AY556476、AY556473三個(gè)毒株關(guān)系較近，而與一株美國(guó)株