豬星狀病毒分離鑒定和分子流行病學(xué)調(diào)查及生物學(xué)特性研究.pdf

1、星狀病毒(Astrovirus，AstV)屬于人獸共患病病原，與多種動物的腹瀉性疾病有關(guān)，目前廣泛分布于世界各地。星狀病毒常同冠狀病毒、輪狀病毒、嵌杯狀病毒及其它腸道病毒混合感染造成急性胃腸炎，尤其對小孩及幼畜危害最大。本研究對豬星狀病毒進(jìn)行分離鑒定和分子流行病學(xué)調(diào)查及生物學(xué)特性研究，將為今后預(yù)防豬星狀病毒感染和傳播提供實驗方法和手段。
　　 通過對廣西某豬場經(jīng)RT-nPCR檢測呈豬星狀病毒陽性的糞樣進(jìn)行病毒分離，獲得兩株能在P

2、K-15細(xì)胞上增殖，并能使該細(xì)胞變大、胞漿內(nèi)出現(xiàn)顆粒，最后細(xì)胞破碎、脫落等細(xì)胞病變的病毒；在電鏡下觀察，該病毒呈典型的星狀結(jié)構(gòu)，直徑約28～35nm;動物實驗顯示，攻毒豬出現(xiàn)溫和性腹瀉，體重減輕，腸系膜淋巴結(jié)腫大和腸絨毛變短等臨床癥狀和在絨毛上皮細(xì)胞層及絨毛腔有大量淋巴細(xì)胞及少量巨噬細(xì)胞浸潤等病理變化。病毒的成功分離，為豬星狀病毒分子生物學(xué)以及致病機(jī)制的研究提供材料。
　　 應(yīng)用RT-nPCR方法，對采自廣西7個市縣27個不同規(guī)

3、模化豬場和廣東湛江2個不同規(guī)?；i場共315份豬腹瀉樣品進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示豬場陽性率達(dá)82.8％(24/29)；樣品陽性率達(dá)40.3％(127/315)；0～30日齡的小豬感染率最高，達(dá)44.9％(53/118)；春季(2～4月)感染率最高，為54.3％(38/70)。調(diào)查結(jié)果表明，豬群中普遍存在豬星狀病毒感染。另外，本研究克隆所得46株P(guān)AstVs核苷酸同源性為84.6％～100％，氨基酸同源性為51.1％～100％，遺傳進(jìn)化分析顯示

4、克隆所得46株P(guān)AstVs均屬于豬星狀病毒Ⅰ型，且又可分為5個亞群。這是首次對我國豬場進(jìn)行大規(guī)模豬星狀病毒分子流行病學(xué)研究。
　　 參考GenBank上發(fā)表的豬星狀病毒亞基因組序列，設(shè)計1對引物，對豬星狀病毒廣西流行株衣殼蛋白基因進(jìn)行擴(kuò)增，最終克隆得到PAstV/NNJG7株的衣殼蛋白完整序列?；蚍治霭l(fā)現(xiàn)，其ORF2全長2358bp，編碼786個氨基酸；與PAstV-Ⅰ型參考株核苷酸同源性最高，為77.3％～79.4％；在OR