CC3-TIP30調(diào)控肝癌細(xì)胞脂肪代謝的研究.pdf

1、目的:肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是多發(fā)的惡性腫瘤之一，其發(fā)生和發(fā)展是一個(gè)多因素參與的復(fù)雜調(diào)控過程。腫瘤脂肪代謝給快速增長(zhǎng)的腫瘤細(xì)胞提供增殖所需要的能量，并且脂質(zhì)的再生成已經(jīng)成為HCC的重要標(biāo)志。我們發(fā)現(xiàn)增加抑癌基因CC3/TIP30的表達(dá)可以抑制脂代謝轉(zhuǎn)錄調(diào)控關(guān)鍵因子SREBP1的表達(dá)并最終使生脂酶FASN和SCD表達(dá)下降從而降低脂代謝水平并抑制腫瘤的生長(zhǎng)，因此揭示HCC中脂代謝調(diào)節(jié)的分子機(jī)制，

2、為靶向脂代謝的腫瘤診斷和治療帶來新思路。
　　方法:通過慢病毒包裝質(zhì)粒下調(diào)和過表達(dá)CC3/TIP30。使用RNA-Seq芯片分析發(fā)現(xiàn)，CC3/TIP30參與了肝癌細(xì)胞代謝特別是脂肪酸的代謝過程，使用Q-PCR技術(shù)檢驗(yàn)了芯片的結(jié)論。通過Q-PCR和免疫印跡技術(shù)(WB)檢測(cè)到調(diào)控脂肪酸代謝的關(guān)鍵酶。并使用免疫熒光和WB證明CC3/TIP30增加了磷酸化AKT和mTOR的表達(dá)，結(jié)果使AKT通路被激活增加SREBP1的表達(dá)和核聚集。體外使

3、用MTS和平板克隆實(shí)驗(yàn)證實(shí)通過CC3/TIP30和SREBP1對(duì)脂代謝的調(diào)節(jié)可以影響HCC細(xì)胞的增殖和生長(zhǎng)。裸鼠皮下移植瘤模型建立揭示脂代謝異常對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響，并通過免疫組織化學(xué)(IHC)檢測(cè)生脂酶和CC3/TIP30的關(guān)系。收集80例HCC患者的組織標(biāo)本并使用IHC分析了其CC3/TIP30和SREBP1的相對(duì)表達(dá)情況及對(duì)HCC患者預(yù)后的影響。
　　結(jié)果:通過慢病毒包裝質(zhì)粒成功下調(diào)和過表達(dá)了CC3/TIP30在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)

4、。使用RNA-Seq芯片分析發(fā)現(xiàn)，CC3/TIP30參與了肝癌細(xì)胞代謝特別是脂肪酸的代謝過程，使用Q-PCR技術(shù)檢驗(yàn)了芯片的結(jié)論發(fā)現(xiàn)CC3/TIP30對(duì)肝癌脂肪酸代謝的調(diào)控主要集中在脂肪酸的合成過程中。下調(diào)CC3/TIP30的表達(dá)使肝癌細(xì)胞內(nèi)脂滴增多以及甘油三酯的表達(dá)增多。使用Q-PCR和免疫印跡技術(shù)驗(yàn)證了脂肪酸代謝的調(diào)控樞紐SREBP1可以感應(yīng)CC3/TIP30的表達(dá)變化并指導(dǎo)生脂酶FASN，SCD和的表達(dá)水平發(fā)生相應(yīng)的改變。

5、　　使用WesternBlotting和免疫熒光方法證明CC3/TIP30的表達(dá)增加了磷酸化AKT和mTOR的表達(dá)，并使AKT通路被激活增加SREBP1的表達(dá)和核聚集。被激活的脂代謝通路指導(dǎo)生脂酶FASN，SCD表達(dá)增多，并使HCC細(xì)胞中脂滴和甘油三酯儲(chǔ)存變多。這個(gè)結(jié)論可以被AKT抑制劑的阻斷作用逆轉(zhuǎn)。
　　下調(diào)CC3/TIP30作用于SREBP1介導(dǎo)的脂代謝途徑促進(jìn)HCC細(xì)胞生長(zhǎng)。在體外使用MTS檢測(cè)HCC細(xì)胞增殖和平板克隆檢測(cè)

6、細(xì)胞生長(zhǎng)均證明下調(diào)SREBP1可以抑制因CC3/TIP30下調(diào)造成的肝癌細(xì)胞增殖和生長(zhǎng)能力的增高。在裸鼠皮下移植瘤模型中使用慢病毒干擾了CC3/TIP30和SREBP1的表達(dá)并根據(jù)實(shí)驗(yàn)分組了不同下調(diào)組合證明體內(nèi)干擾SREBP1的表達(dá)會(huì)阻滯因CC3/TIP30缺乏引起的腫瘤生長(zhǎng)增快，并且可以引起腫瘤組織中甘油三酯水平相同趨勢(shì)的波動(dòng)，通過免疫組織化學(xué)分析證明SREBP1以及生脂酶的FASN、SCD在裸鼠以內(nèi)的表達(dá)量和CC3/TIP30的表達(dá)

7、量成反比。
　　通過SREBP1和CC3/TIP30蛋白的表達(dá)組合分析可以更精準(zhǔn)的評(píng)估HCC患者生存和預(yù)后。實(shí)驗(yàn)通過收集并結(jié)合患者臨床資料比對(duì)分析，證明使用SREBP1和CC3/TIP30蛋白的組合表達(dá)量可以預(yù)測(cè)HCC患者的生存期和預(yù)后。
　　結(jié)論:TIP30負(fù)性調(diào)節(jié)肝癌細(xì)胞脂代謝。SREBP1是CC3/TIP30缺乏介導(dǎo)的促進(jìn)脂肪生成的必要條件并通過Akt/mTOR通路進(jìn)行調(diào)控。下調(diào)CC3/TIP30作用于SREBP1介導(dǎo)