lncRNA HOTAIR調(diào)控肝癌細胞自噬的機制研究.pdf

1、目的:
　　通過檢測lncRNA HOTAIR在肝癌組織中的表達情況并分析其與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。研究HOTAIR對肝癌細胞自噬的影響并篩選出所調(diào)控的自噬相關(guān)基因。
　　方法:
　　1.收集2012年到2015年手術(shù)切除的54例肝癌及癌旁組織的標本，所有肝癌標本均經(jīng)病理確診為肝癌細胞肝癌。采用real-time RT-PCR檢測HOTAIR在54例肝癌癌組織與癌旁組織中的表達情況，并分析其與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。

2、
　　2.利用細胞轉(zhuǎn)染技術(shù)分別構(gòu)建HOTAIR高表達和低表達的肝癌細胞株，以空載質(zhì)粒為陰性對照組。利用real-time RT-PCR檢測HOTAIR轉(zhuǎn)染效率。通過westernblot、免疫熒光、透射電鏡等實驗方法證實HOTAIR對肝癌細胞自噬的影響。
　　3.采用real-time RT-PCR篩選出HOTAIR高表達肝癌細胞株中自噬相關(guān)基因的表達變化。并通過western blot進行進一步證實。
　　結(jié)果:

3、r>　　1.肝癌組織中HOTAIR的表達水平高于癌旁組織，差異具有顯著性;HOTAIR的表達水平與腫瘤的大小有關(guān)，與其他臨床病理參數(shù)無關(guān);
　　2.western blot、免疫熒光、透射電鏡等試驗結(jié)果均證實HOTAIR促進肝癌細胞自噬的發(fā)生。其中HOTAIR細胞轉(zhuǎn)染效率為15倍，阻斷效率為70％。
　　3.PCR和western blot結(jié)果顯示HOTAIR能夠明顯促進Atg3和Atg7的表達。
　　結(jié)論: