瑞得狼毒藥物血清誘導人肝癌細胞SMMC-7712凋亡的分子機制研究.pdf

1、目的：測定瑞香狼毒藥物血清對人肝癌細胞SMMC-7721生長的抑制作用以及對VEGF和Survivin表達的影響，探討其誘導人肝癌細胞凋亡的機制。
　　 方法：本實驗用SMMC-7721作為瑞香狼毒藥物血清體外作用的模型，SMMC-7721，按常規(guī)細胞培養(yǎng)方法進行培養(yǎng)，以不同濃度和不同時間采集的瑞香狼毒藥物血清處理SMMC-7721細胞24h和48h時，用MTT法觀察瑞香狼毒藥物血清對SMMC-7721的增殖抑制作用，用光學顯微

2、鏡觀察SMMC-7721的形態(tài)變化，用流式細胞儀觀察SMMC-7721細胞周期的變化，用Westem blot檢測瑞香狼毒藥物血清作用SMMC-7721細胞24h時SMMC-7721內(nèi)最小生存素和血管內(nèi)皮生長因子蛋白表達的改變。
　　 結(jié)果：瑞香狼毒藥物血清可明顯抑制SMMC-7721的增殖，這種抑制效應在每個濃度2h采集的瑞香狼毒藥物血清作用最明顯，且在作用24h時與藥物濃度呈正相關(guān)，而在48h沒有顯示出明顯的劑量依賴性。

3、r>　　 光學顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)SMMC-7721在瑞香狼毒藥物血清作用下細胞形態(tài)發(fā)生了明顯變化，SMMC-7721出現(xiàn)凋亡現(xiàn)象，有凋亡小體形成。
　　 流式細胞術(shù)分析顯示，瑞香狼毒藥物血清作用24h可明顯誘導SMMC-7721細胞被阻滯在G1期S期細胞減少，并且在2h采集的瑞香狼毒藥物血清作用更為明顯，表現(xiàn)出劑量依賴性，48h有此變化但效果不如24h明顯。
　　 以上三個實驗結(jié)果顯示，2h采集的瑞香狼毒藥物血清藥效最好

4、并呈現(xiàn)出劑量依賴性，故進行Western Blot實驗時只是針對性地選擇了五個濃度，即3g／kg、6g／kg、9g／kg、12g／kg和對照組。結(jié)果顯示SMMC-7721中可以檢測到VEGF和Survivin蛋白的表達，說明瑞香狼毒藥物血清可以下調(diào)VEGF和Survivin蛋白的表達。
　　 結(jié)論：瑞香狼毒藥物血清能明顯抑制SMMC-7721增殖，表現(xiàn)出劑量依賴性，而且以2h采集的瑞香狼毒藥物血清作用最為明顯，瑞香狼毒藥物血清可