刺果番荔枝誘導肝癌細胞凋亡分子機制的研究.pdf

1、肝癌是最常見的非傳染性的疾病之一，該癌癥的發(fā)生率每年都有升高。當前的治療手段如化學療法等的毒副作用大，因此尋找新型有效、安全的治療藥物是亟待解決的問題，而天然化合物是抗癌新藥的主要來源，逐漸引起了人們的關注。刺果番荔枝被俗稱作“癌癥殺手”，能導致多種腫瘤細胞發(fā)生凋亡，然而其抗癌及誘導凋亡的分子機制仍需要進一步研究。本文針對刺果番荔枝葉片的乙醇提取物，以肝癌HepG2細胞作為細胞模型，探究該提取物能否以及如何誘導肝癌細胞發(fā)生凋亡。

2、　　主要結(jié)果如下：
　　1. MTT法檢測到刺果番荔枝的提取物能夠降低肝癌HepG2細胞和結(jié)腸癌細胞HCT116的活力，并呈時間和劑量依賴效應；流式細胞術的結(jié)果顯示，該提取物可以促使SubG1期（指示凋亡細胞）細胞數(shù)增多，并具有劑量依賴效應；TUNEL法結(jié)果顯示，提取物處理（120μg/ml）的細胞凋亡率明顯較高。
　　2.蛋白質(zhì)組學技術結(jié)果：通過對比處理組和對照組的差異蛋白點，共找到14個差異蛋白并進行了蛋白身份的鑒定；之

3、后對14個蛋白進行KEGG通路分析尋找可能的分子通路，從分析結(jié)果中發(fā)現(xiàn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激信號通路，并且有三個蛋白涉及其中：分別為HSP70、GRP94、DPI-5蛋白。
　　3.通過Western blot實驗鑒定，該提取物增加了Bip和CHOP蛋白的表達量，提高了PERK和eIF2α的磷酸化水平，并呈現(xiàn)時間劑量依賴效應。當通過siRNA技術敲低CHOP蛋白的水平時，提取物引起的凋亡受到抑制，有時間依賴效應。siCHOP敲低CHOP的表達

4、，發(fā)現(xiàn)細胞的凋亡率較處理組明顯減小。
　　4.為了進一步研究該提取物誘導肝癌細胞凋亡的分子機制，我們試圖檢測該提取物是否引起了腫瘤細胞內(nèi)活性氧(reactive oxygen species， ROS）的升高。通過DCFH-DA熒光探針定量細胞內(nèi)的ROS水平，并使用抗氧化劑NAC驗證結(jié)果。發(fā)現(xiàn)提取物處理細胞2 h后，細胞內(nèi)ROS的水平較對照組顯著性升高，同時NAC能顯著性抑制提取物引起的ROS的升高和細胞凋亡。
　　結(jié)論：<