蟾蜍水提物誘導(dǎo)人肝癌SMMC7721細(xì)胞凋亡的初步研究.pdf

1、目的：　　觀察蟾蜍水提物(Water-soluble extract cornponents of Toad，WECT)對(duì)人肝癌細(xì)胞株SMMC7721細(xì)胞增殖及凋亡情況的影響；檢測(cè)蟾蜍水提物對(duì)SMMC7721細(xì)胞株細(xì)胞周期的影響，并對(duì)其誘導(dǎo)凋亡的相關(guān)作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。 方法： 以不同濃度的蟾蜍水提物作用于肝癌細(xì)胞株SMMC7721，應(yīng)用噻唑藍(lán)還原法(MTT)檢測(cè)蟾蜍水提物對(duì)肝癌細(xì)胞株SMMC7721細(xì)胞增殖的抑制作

2、用及細(xì)胞毒作用；應(yīng)用倒置顯微鏡觀察蟾蜍水提物對(duì)SMMC7721細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響；Annexin V/PI雙染色法檢測(cè)蟾蜍水提物干預(yù)后SMMC7721細(xì)胞凋亡及壞死的情況；dUTP缺口末端標(biāo)記技術(shù)，即TUNEL法檢測(cè)蟾蜍水提物干預(yù)后SMMC7721細(xì)胞的早期凋亡；流式細(xì)胞術(shù)分析SMMC7721細(xì)胞經(jīng)藥物作用后其周期分布情況的變化。 結(jié)果： (1)．蟾蜍水提物可以明顯抑制細(xì)胞分裂增殖，其半數(shù)抑制濃度約0.065mg/ml，隨

3、著濃度增加誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡時(shí)間縮短，程度增加； (2)蟾蜍水提物能顯著抑制SMMC7721細(xì)胞生長(zhǎng)，生長(zhǎng)曲線顯示W(wǎng)ECT組細(xì)胞的增殖速度遠(yuǎn)慢于對(duì)照組，不同時(shí)段的wECT組細(xì)胞抑制率也明顯升高(P<0.05)；干預(yù)后的SMMC7721細(xì)胞出現(xiàn)了典型的病理變化，細(xì)胞形態(tài)由多邊形變成圓形，染色質(zhì)疏松，細(xì)胞核溶解，形態(tài)學(xué)改變具有時(shí)間依賴性。 (3)細(xì)胞凋亡與WECT程濃度和時(shí)間依賴關(guān)系，隨著濃度的增加及時(shí)間的延長(zhǎng)細(xì)胞凋亡比例明顯增加

4、，與空白對(duì)照有顯著差異(P<0.05)。 (4)流式細(xì)胞儀測(cè)定顯示細(xì)胞周期發(fā)生明顯改變，細(xì)胞分裂阻滯在S期，與空白對(duì)照組比較有顯著差異性(P<0.05)。 結(jié)論： 1.0.008mg/mL及以上濃度蟾蜍水提物對(duì)人肝癌SMMC7721細(xì)胞具有顯著細(xì)胞毒作用，形態(tài)學(xué)和DNA片段化檢測(cè)證實(shí)蟾蜍水提物誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡以凋亡為主； 2．蟾蜍水提物對(duì)肝癌SMMC7721細(xì)胞增殖抑制作用呈濃度、時(shí)間依賴性，24、48和7