組蛋白特定甲基化位點突變對完整及第二結構域缺失的ELP3轉錄功能的影響.pdf

1、EFFECTIONSOFHISTONESPECIALSITESMETHYLATIONCHANGESONTRANSCRIPTIONFUNCTIONSOFCOMPLETEANDTHESECONDSTRUCTUREDoMAINFLAWELP3ADissertationSubmittedtotheGraduateSchoolofHenanNormalUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsf

2、ortheDegreeofMasterofScienceByWangYanfangSupervisor：ProfLiFenMay2011‘‘Iflllflllflrllll／IJllIIIllllfY1960331摘要目的：酵母Elongator復合物由6個亞基組成，它作為一個具有組蛋白乙酰基轉移酶(histoneacetyltransferase，HAT)活性的復合體，協(xié)助高度磷酸化的RNA聚合酶II(RNApolymeraseII，

3、RNAPII)參與SSA3、GALl等基因的轉錄延伸過程。Elp3是高度保守的組蛋白乙酰轉移酶復合物Elongator的催化亞基，其亞基C端的保守區(qū)是組蛋白乙?；D移酶活性結構域，在N端存在第二結構域一潛在的組蛋白去甲基化酶活性結構域。多數(shù)研究結果表明Elp3作為一個HAT協(xié)助RNAPII參與GAL!、SSA3等基因的轉錄延伸過程?！芯勘砻鹘湍窫lp3的N端SAM類似結構域可能與甲基化有關，但另外的研究者認為該結構域不具有催化活性，

4、而與完整復合物的形成有關。目前尚不確定Elp3是否擁有生物信息學推測的組蛋白去甲基化酶活性，也不清楚Elongator轉錄功能與組蛋白甲基化有何關聯(lián)。為了解組蛋白甲基化時完整及N端結構域缺失Elp3是否參與GALl、SSA3基因的轉錄，確定Elp3轉錄功能與組蛋白特定位點甲基化的關系。本文以特定甲基化位點突變(H4K20、H3K79、H4K20／H3K79)elp3A菌株為實驗材料，通過染色質免疫沉淀實驗確定組蛋白特定甲基化位點突變對完

5、整及第二結構域缺失Elp3轉錄功能的影響。這些研究對于建立酵母Elongator通過表觀遺傳修飾參與基因表達調控的模型，進一步研究人Elongator功能、探索與其功能異常相關的疾病的發(fā)生機理具有重要意義。方法：本實驗運用Elp3抗體對轉入Elp3系列質粒的組蛋白突變elp3A菌株進行染色質免疫沉淀，以InputDNA和沉淀DNA作模板進行特異引物的PCR，確定特定組蛋白甲基化位點突變對完整及第二結構域缺失的Elp3轉錄功能的影響。結果