第二結(jié)構(gòu)域缺失對(duì)酵母Elp3與Elp4及其它蛋白相互作用的影響.pdf

1、真核生物的RNA聚合酶Ⅱ以多蛋白復(fù)合體形式發(fā)揮作用。1999年從高度磷酸化的RNA聚合酶Ⅱ中首次分離出Elongator復(fù)合物。已經(jīng)證明該復(fù)合物在以染色質(zhì)為模板的轉(zhuǎn)錄延伸中具有非常重要的作用。該復(fù)合物由六個(gè)亞基組成，分別是Elpl，elp2，elp3，elp4，elp5，elp6。其中具有組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶活性的催化亞基Elp3的功能最引人注目，它屬于GANT家族。Elp3缺失可導(dǎo)致多種生長(zhǎng)缺陷，其中很多與轉(zhuǎn)錄延伸有關(guān)。Elp3在神經(jīng)生物

2、學(xué)中有至關(guān)重要的作用。Elongator復(fù)合物可以對(duì)組蛋白H3的第14位賴氨酸和組蛋白H4的第8位賴氨酸進(jìn)行乙?；揎?，其Elp3的保守HAT結(jié)構(gòu)域?yàn)槠湫惺构δ芩匦琛Ｉ镄畔W(xué)分析表明Elp3的N端有一個(gè)S-腺苷甲硫氨酸激酶樣結(jié)構(gòu)域，它與RadicalSAM家族具有序列同源性，包含F(xiàn)e4S4簇，可結(jié)合S-腺苷甲硫氨酸。據(jù)報(bào)道，該結(jié)構(gòu)域結(jié)合S-腺苷甲硫氨酸后，改變了鐵硫聚簇的電子順磁共振光譜，通過(guò)定向點(diǎn)誘變鑒定該聚簇中殘留的半胱氨酸含量

3、，證明它可以分解S-腺苷甲硫氨酸。因而認(rèn)為Elp3除了具有HAT活性外，還可能具有一個(gè)未知功能的催化結(jié)構(gòu)域。
　　 酵母Elp3是Elongator復(fù)合物的催化亞基，其N端和C端分別擁有SAM激酶樣(SAMradical)和組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶(HAT)結(jié)構(gòu)域，且兩結(jié)構(gòu)域均為Elongator行駛功能所必需。已知Elp3在核中通過(guò)對(duì)組蛋白尾部特定賴氨酸殘基的乙?；揎?，參與基因的轉(zhuǎn)錄延伸，在細(xì)胞質(zhì)中參與保外分泌并與tRNA的修飾和a

4、-tublin的乙?；榷喾N生物活動(dòng)有關(guān)。目前對(duì)Elp3第二功能結(jié)構(gòu)域的功能認(rèn)識(shí)尚不統(tǒng)一。Paraskevopoulo等人證實(shí)Elpe3的第二結(jié)構(gòu)域可結(jié)合SAM，表明它可能擁有生物信息學(xué)推測(cè)的組蛋白去甲基化酶活性。而Greenwood等人認(rèn)為第二結(jié)構(gòu)域的功能主要體現(xiàn)在結(jié)構(gòu)方面即為Elongator復(fù)合物完整性所必需，其本身并無(wú)催化活性。因此，Elp3第二結(jié)構(gòu)域的功能還有待于進(jìn)一步研究證實(shí)。
　　 已知酵母Elp3第二結(jié)構(gòu)域缺失可

5、顯著影響其功能。而所有蛋白發(fā)揮功能，必然涉及到與其他蛋白的相互作用。因此，本論欲通過(guò)酵母雙雜交分析和PullDown實(shí)驗(yàn)，研究第二域缺失對(duì)Elp3與相關(guān)蛋白相互作用的影響，以確定Elp3第二結(jié)構(gòu)域的功能地位。結(jié)果表明，缺失第二結(jié)構(gòu)域的Elp3不能與Elp4、CTK1等蛋白相互作用，表明該結(jié)構(gòu)域在Elongator復(fù)合物形成和與其它蛋白相互作用中有結(jié)構(gòu)方面的作用。
　　 該研究加深了對(duì)Elp3功能的認(rèn)識(shí)，為深入研究Elp3第二結(jié)構(gòu)