蛋白CMS SH3結(jié)構(gòu)域溶液結(jié)構(gòu)的測定及其與c-Cbl C-末端多肽相互作用的研究.pdf

1、本論文工作的重點(diǎn)是與人類疾病相關(guān)的蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)域的克隆表達(dá)及結(jié)構(gòu)、功能的研究。我們克隆,表達(dá)和純化了人源蛋白質(zhì)CMS N端的第二個(gè)SH3結(jié)構(gòu)域(CMSSH3B),并用NMR的方法測定了這個(gè)結(jié)構(gòu)域的溶液結(jié)構(gòu)。同時(shí)通過Biacore和NMR化學(xué)干擾實(shí)驗(yàn)研究CMSSH3B與來自c-Cb1 C-末端多肽(Cb1-p)的結(jié)合作用。我們第一次給出了CMSSH3B水溶性結(jié)構(gòu),并通過NMR化學(xué)位移干擾和Biacore試驗(yàn)第一次確定c-Cb1 C末端肽段

2、701-712參與了c-Cb1與CMS的相互作用。我們給出了CMSSH3B與Cb1-p相互作用的結(jié)合模型。所有這些結(jié)果都有利于CMS功能進(jìn)一步的研究
　　第一章是蛋白質(zhì)CMS的研究背景和功能簡介。CMS(Cas ligand witn multiple Src homology 3 domians)是一種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的銜接蛋白質(zhì)(adaptor protein)。它最初是在酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)中作為p130cas的結(jié)合蛋白質(zhì)被發(fā)現(xiàn)的。

3、CMS自身有很多可以與其他蛋白質(zhì)相互作用的結(jié)合位點(diǎn),通?？梢耘c其他蛋白質(zhì)形成更加復(fù)雜的蛋白質(zhì)復(fù)合物,這就是使得CMS在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中通常是以腳手架蛋白質(zhì)(scaffolding protein)的角色出現(xiàn),從而調(diào)控細(xì)胞的生長,分化,繁殖,遷移以及凋亡。這些結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是CMS行使生化功能的基礎(chǔ)。
　　在第二章中,我們使用NMR波譜技術(shù)測定了CMSH3B的溶液結(jié)構(gòu)。CMS在N-末端有三個(gè)SH3結(jié)構(gòu)域,這些結(jié)構(gòu)域是CMS與其它蛋白質(zhì)作用的

4、結(jié)合區(qū)域。在這三個(gè)SH3結(jié)構(gòu)域中,第二個(gè)與第三個(gè)SH3結(jié)構(gòu)域序列同源性為48.2％,而第一個(gè)和第二個(gè)SH3結(jié)構(gòu)域的序列同源性為42%。因此,第二個(gè)和第三個(gè)SH3結(jié)構(gòu)在功能上可能更為相似。已有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)CMS與c-Cb1的相互作用是通過其第二個(gè)SH3結(jié)構(gòu)域結(jié)合到c-Cb1的C-末端上,我們研究的重點(diǎn)放在CMS第二個(gè)SH3結(jié)構(gòu)域上。通過分子克隆技術(shù),編碼CMSSH3B的基因在大腸桿菌中得到了克隆和表達(dá)。然后利用Ni離子親和層析法,這個(gè)重組蛋白