綠膿桿菌外毒素轉(zhuǎn)位結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)與ImmunoGrB融合蛋白腫瘤殺傷功能關(guān)系的研究.pdf

1、將治療性的蛋白或基因有效的導(dǎo)入細(xì)胞,從而達(dá)到藥物或者基因治療的目的,是治療惡性腫瘤一直的研究領(lǐng)域.但由于細(xì)胞膜的通透性低,使得這一方法困難重重.效應(yīng)分子能否有效地通過(guò)細(xì)胞的膜性結(jié)構(gòu),也是當(dāng)今惡性腫瘤的基因治療中首先要解決的問(wèn)題.近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一些蛋白或其某部分結(jié)構(gòu)域可以穿越細(xì)胞的膜性結(jié)構(gòu),將效應(yīng)分子運(yùn)送到細(xì)胞漿甚至細(xì)胞核,并稱這種具有轉(zhuǎn)位功能的蛋白或者多肽為轉(zhuǎn)位蛋白或細(xì)胞穿透肽.該文構(gòu)建了編碼三種包含不同長(zhǎng)度PE轉(zhuǎn)位結(jié)構(gòu)域:1)PE(27

2、5-358aa);2)PE(275-280aa);3)無(wú)PE的重組抗體粒酶B基因(e23sFv-PEⅡ-GrB),即將不同截短型PE轉(zhuǎn)位結(jié)構(gòu)域的N端和C端分別與針對(duì)HER-2的單鏈抗體基因和活性型的granzymeB(GrB)基因相連,或?qū)捂溈贵w基因直接與GrB基因相聯(lián)接并將它們命名為ImmunoGrB(PE275-358)、ImmunoGrB(PE275-280)和ImmunoGrB(PE-null),均與PE轉(zhuǎn)位結(jié)構(gòu)域?yàn)?53-3

3、58aa的ImmunoGrB(PE253-358)進(jìn)行比較.該文進(jìn)一步將含有ImmunoGrB(PE253-358)基因構(gòu)建到重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體上,獲得pLNCX-ImmunoGrB(PE253-358)(PE253-358),轉(zhuǎn)染進(jìn)PA317細(xì)胞系進(jìn)行包裝,獲得了滴度較高的單克隆包裝細(xì)胞株.應(yīng)用含ImmunoGrB基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒體外感染T淋巴細(xì)胞進(jìn)行,然后將感染后得到的T淋巴細(xì)胞經(jīng)尾靜脈注射裸鼠,體內(nèi)抑瘤實(shí)驗(yàn),觀察到該方法可以使裸鼠