小腸黏膜下基質(zhì)復合脂肪間充質(zhì)干細胞重建陰道的可行性研究.pdf

1、目的：研究脂肪間充質(zhì)干細胞在小腸黏膜下基質(zhì)重建陰道過程中的作用，為組織工程學陰道重建探討新的思路。
　　方法：采用Ⅰ型膠原酶消化法分離提取SD大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞（adipose-derived stem cells,ASCs），流式細胞技術檢測第3代ASCs細胞表面CD90、CD45、CD29、CD34、CD44、CD105抗原的表達情況，對第3代ASCs進行成骨、成脂誘導培養(yǎng)，茜素紅及油紅O染色鑒定誘導分化情況。將第3代ASC

2、s按照2×105/cm2、4×105/cm2的細胞密度與SIS復合培養(yǎng)，于復合后24h、3d、5d及7d行MTT法檢測細胞存活率。CM.dil標記第2代ASCs，熒光顯微鏡下觀察。將標記后第3代ASCs按照細胞計數(shù)1.5×106個與2×2cm2的SIS支架復合培養(yǎng),5天后移植。選取200-250g雌性SD大鼠，手術切除正常陰道后分別將單純SIS支架或復合有CM.dil標記ASCs的SIS支架植入陰道殘腔內(nèi)，上端與宮頸口縫合固定，下端與切

3、口周圍皮膚吻合。術后7d、14d、28d切取“人工陰道”組織，復合支架組行冰凍切片，熒光顯微鏡下檢測標記有CM.dil的ASCs殘留情況，單純支架組及復合支架組“人工陰道”均進行HE、Masson染色，對比兩組“人工陰道”組織結(jié)構(gòu)學特點，進而比較陰道重建效果。
　　結(jié)果：采用酶消化法提取的ASCs形態(tài)為長梭形，融合度達80％后呈螺旋狀排列。流式檢測：第3代ASCs細胞表面抗原CD44、CD90、CD29、CD105、CD34及CD

4、45的表達率分別為97.48%、99.91%、99.99%、100%、58.05%和0.79%。茜素紅及油紅O染色均為陽性。MTT法檢測ASCs與SIS復合培養(yǎng)5d細胞存活率最高。熒光顯微鏡下觀察CM.dil標記的ASCs細胞膜呈橙紅色，細胞質(zhì)及細胞核則表達為類圓形暗區(qū)，標記率可達100%。移植后的單純SIS支架組及復合有ASCs的SIS支架組均可形成新生管狀陰道，復合支架組冰凍切片免疫熒光檢測可見CM.dil標記的ASCs存在于組織各