脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合纖維蛋白膠立體培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、文章從以下兩部分就脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合纖維蛋白膠立體培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)行了綜述。
　　第一部分成年兔脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分離、培養(yǎng)、鑒定及成軟骨誘導(dǎo)
　　目的：研究脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)生物學(xué)特性。建立其分離和培養(yǎng)的方法并探討其向軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化的能力。
　　方法：成年新西蘭大白兔取腹股溝及頸部脂肪，膠原酶消化分離。用含9-10％胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)傳代。在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞增長(zhǎng)的形態(tài)。對(duì)3.7代細(xì)胞行MTT

2、測(cè)定其增值能力。對(duì)3代細(xì)胞行軟骨誘導(dǎo)分化。觀察倒置顯微鏡觀察下細(xì)胞的增長(zhǎng)情況。誘導(dǎo)分化1周后進(jìn)行細(xì)胞番紅0染色，RT-PCR測(cè)定軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果：原代脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)2天后開(kāi)始貼壁生長(zhǎng)，呈現(xiàn)梭形及多角細(xì)胞生長(zhǎng)，7-9天后細(xì)胞幾乎融合呈旋渦狀排列。培養(yǎng)的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞體外增值較快，增長(zhǎng)比較穩(wěn)定。成軟骨誘導(dǎo)后2一3天細(xì)胞發(fā)生聚集。對(duì)高密度細(xì)胞團(tuán)塊番紅O染色陽(yáng)性，未發(fā)生聚集的細(xì)胞則呈弱陽(yáng)性或陰性。RT-PC

3、R測(cè)定顯示細(xì)胞表達(dá)11型膠原mRNA。
　　結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)兔脂肪組織基質(zhì)來(lái)源的細(xì)胞進(jìn)行分離、培養(yǎng)。根據(jù)紅細(xì)胞生長(zhǎng)方式是懸浮生長(zhǎng)，通過(guò)自然純化的方法去除培養(yǎng)過(guò)程中的紅細(xì)胞和雜質(zhì)，獲得了增值迅速，長(zhǎng)期傳代后仍具有穩(wěn)定增值的細(xì)胞。三向誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)證明細(xì)胞具有分化的潛能。ADSCs可以作為組織工程的種子細(xì)胞。
　　第二部分不同密度脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合纖維蛋白膠對(duì)成軟骨能力的影響
　　目的：研究不同種植密度的兔脂肪脂肪間充質(zhì)干細(xì)

4、胞復(fù)合纖維蛋白膠體外三維立體培養(yǎng)下，細(xì)胞成軟骨分化的能力。
　　方法：取3代培養(yǎng)兔脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分別以2×109L-1，2×1010L-1，2×1011L-1，種植于含纖維蛋白膠的96孔板中，倒置顯微鏡及掃描電鏡觀察。成軟骨誘導(dǎo)培養(yǎng)3周后，取樣、切片行蘇木精-伊紅染色、膠原免疫組化，RT-PCR檢測(cè)。
　　結(jié)果：誘導(dǎo)三周后各組細(xì)胞在纖維蛋白膠上黏附較好，且高密度2×1011L-1，組細(xì)胞排列緊密，基質(zhì)形成較多，掃描電鏡下高