mEGF乙醇脂質(zhì)體的制備及透皮途徑和生物學(xué)活性的研究.pdf

1、目的：越來越多的生物制劑作為一種新的治療選擇進入了藥物市場，并且已證實生物制劑具有治療價值。生物制劑多數(shù)為蛋白或者多肽類物質(zhì)。這些具有生物學(xué)活性的大分子，其任何構(gòu)象發(fā)生變化都會導(dǎo)致生物學(xué)活性的喪失。在選擇系統(tǒng)給藥途徑時，生物制劑不可避免地受到酶的降解、肝臟代謝，以及一系列的不良反應(yīng)如：肝腎損傷、胃腸道反應(yīng)等。但是，諸多的實驗已經(jīng)驗證乙醇脂質(zhì)體可以促進生物活性大分子的經(jīng)皮或者透皮吸收，乙醇脂質(zhì)體的這種特性可以有效的減少生物制劑系統(tǒng)給藥的缺

2、點。
　　 本次實驗的目的為制備一種生物制劑的乙醇脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)，觀察它的局部滲透途徑，以及生物制劑乙醇脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)的生物學(xué)活性。我們選擇鼠表皮生長因子(mEGF)這個生物制劑， EGF 已被證實可以作為毛囊生長期的生物學(xué)開關(guān)，可以將毛囊維持在生長期。
　　 方法：mEGF 乙醇脂質(zhì)體含有質(zhì)量分數(shù)為30％的乙醇、5％的DPPC、以及不同濃度的mEGF。在透射電鏡(TEM)和原子力顯微鏡(AFM)下觀察mEGF 乙醇脂質(zhì)

3、體的形態(tài)特征，使用高效液相色譜法(HPLC)測定該脂質(zhì)體的包封率。選擇不同的時間間隔，將制備完畢的mEGF 乙醇脂質(zhì)體局部外用于C57BL/6小鼠的皮膚，皮膚活檢法取新鮮的小鼠皮膚組織，制作皮膚冰凍切片，免疫熒光染色。然后在激光共聚焦顯微鏡下(CLSM)觀察mEGF 乙醇脂質(zhì)體的局部滲透途徑。將mEGF 乙醇脂質(zhì)體外用C57BL/6小鼠的皮膚，每日2次，持續(xù)14天，觀察小鼠皮膚的顏色變化，記錄小鼠背部皮色變黑的只數(shù)，使用Fisher’s

4、 確切概率法，運用SPSS 13.0版軟件進行統(tǒng)計。將各組小鼠皮膚組織使用蘇木精-伊紅HE 染色，觀察小鼠皮膚組織毛囊形態(tài)的變化。
　　 結(jié)果：在TEM和AFM下觀察到mEGF 乙醇脂質(zhì)體的粒徑均勻分布于40±10nm，包封率為38％。大部分激光共聚焦的圖像顯示mEGF 乙醇脂質(zhì)體主要通過毛囊皮脂腺途徑局部滲透，部分通過角質(zhì)細胞間磷脂途徑滲透。包封于乙醇脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)內(nèi)的mEGF 可以滲透到達毛囊皮脂腺單位的每一個部位，包括皮脂

5、腺、漏斗部、膨出部、毛母質(zhì)以及毛乳頭部位。在體內(nèi)條件下，mEGF 乙醇脂質(zhì)體可以使C57BL/6小鼠的毛囊從休止期進入生長期。結(jié)論：我們建立了有效的mEGF的乙醇脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)。mEGF 被包封于乙醇脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)后仍然保持著其生物學(xué)活性。毛囊皮脂腺系統(tǒng)是生物制劑乙醇脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)的快速和主要的局部滲透途徑。乙醇脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)還可以透過角質(zhì)細胞間磷脂途徑滲透。這些發(fā)現(xiàn)表明，對于皮膚和毛囊的疾病，生物制劑的乙醇脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)途徑具有良好的