殼聚糖修飾對陽離子脂質(zhì)體生物學(xué)性能的影響.pdf

1、利用本課題組合成的陽離子類脂，加入不同助劑制備陽離子脂質(zhì)體。分析其與質(zhì)粒的結(jié)合能力以及復(fù)合物形態(tài)。進(jìn)行細(xì)胞的體外轉(zhuǎn)染，研究轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞毒性。
　　 采用薄層分散和超聲法制備陽離子脂質(zhì)體。瓊脂糖凝膠電泳分析陽離子脂質(zhì)體與質(zhì)粒pGFP-N2(報告基因)DNA的結(jié)合能力，原子力顯微鏡檢測復(fù)合物的形態(tài)。以商品試劑Lipofectamine2000為對照，利用脂質(zhì)體/DNA復(fù)合物轉(zhuǎn)染MCF-7細(xì)胞和HeLa細(xì)胞，熒光顯微鏡觀察其基因轉(zhuǎn)染

2、效率。進(jìn)行了轉(zhuǎn)染條件優(yōu)化，利用MTT法評價轉(zhuǎn)染試劑的毒性。原子力顯微鏡分析表明，脂質(zhì)體/DNA復(fù)合物顆粒的表面不光滑，有一定的黏連性，能較規(guī)律的分散在云母片上。而殼聚糖修飾脂質(zhì)體/DNA復(fù)合物顆粒的表面相對光滑。加入少量或等量DOPE，延滯DNA能力增強(qiáng)，DOPE量多時反而減弱；加入蔗糖酯延滯能力變化不明顯；殼聚糖修飾的脂質(zhì)體，延滯DNA的能力明顯增強(qiáng)。加入蔗糖酯后，轉(zhuǎn)染效率下降；添加DOPE后，轉(zhuǎn)染效率升高；殼聚糖修飾的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率