聚陽離子材料殼聚糖

1、本文格式為 本文格式為 Word 版，下載可任意編輯 版，下載可任意編輯— 1 —聚陽離子材料殼聚糖 聚陽離子材料殼聚糖聚乙烯亞胺-DNA 復(fù)合物的制備和體外細胞轉(zhuǎn)染測驗 測驗導(dǎo)讀 目前常用的轉(zhuǎn)基因載體包括病毒載體和非病毒轉(zhuǎn)基因載體兩大類。病毒載體包括逆轉(zhuǎn)錄病毒(retrovirus)、腺病毒(adenovirus，AV)、腺相關(guān)病毒(adeno-associatedvirus，AAV)、a-病毒載體以及單純皰疹病毒(herpes

2、 simplex virus,HSV)等，由于病毒具有感染細胞的才能，攜帶外源基因進入靶細胞的過程屬于一個主動過程，所以往往具有較高的轉(zhuǎn)基因效率，但病毒載體總體來說具有一些難以抑制的缺陷，如制備繁雜、攜帶才能有限、靶向特異性差、高免疫原性、體內(nèi)不能重復(fù)使用、可能導(dǎo)致感染的潛在危害和引起細胞惡性轉(zhuǎn)化等，這也是雖然病毒載體研究時間較長，但獲得臨床斷定的為數(shù)不多的理由之一。而非病毒轉(zhuǎn)基因載體由于具有合成簡樸、可以攜帶大容量的遺傳物質(zhì)、無免疫原

3、性、無感染和惡性轉(zhuǎn)化潛能等優(yōu)點，因此正受到越來越多的研究者的關(guān)注。 夢想的非病毒載體需要得志以下條件：（1）養(yǎng)護 DNA不被細胞外 DNA 降解酶的降解；（2）攜帶 DNA 穿透細胞膜；（3）養(yǎng)護 DNA 在進入核前不被細胞內(nèi)溶酶體和酶等降解；（4）能有效將有活性的基因插入目的區(qū)；（5）可生本文格式為 本文格式為 Word 版，下載可任意編輯 版，下載可任意編輯— 3 —由于聚陽離子帶有多級胺，故表現(xiàn)出較強的正電荷效應(yīng)，而質(zhì)粒 DNA

4、 為負電荷分子，因此，兩者在溶液中可以通過靜電引力而形成納米微粒復(fù)合物。本測驗將用聚乙烯亞胺為陽離子載體材料，用螢火蟲熒光素酶真核表達質(zhì)粒pCAG（帶有 pCMV 啟動子）舉行復(fù)合物的制備，用 COS7細胞為研究對象，查看聚乙烯亞胺載體材料攜帶質(zhì)粒 DNA在細胞中的轉(zhuǎn)染處境。下圖即為聚陽離子載體材料與質(zhì)粒DNA 形成復(fù)合物并在細胞內(nèi)運轉(zhuǎn)的示意圖。 圖 1 聚陽離子載體材料與質(zhì)粒 DNA 形成復(fù)合物并在細胞內(nèi)運轉(zhuǎn)的示意圖 一、測驗?zāi)康?/p>