柚皮素脂質(zhì)體的制備及其特性研究.pdf

1、黃酮類化合物作為廣泛存在于自然界中的一類天然有機(jī)化合物，具有多種藥理活性，如清除自由基、抗氧化、抗炎、抗病毒、抗腫瘤、降血糖、降血脂、抗骨質(zhì)疏松等。此外，許多黃酮類化合物還被證明具有抗HIV病毒活性的作用。然而，由于許多黃酮類活性成分溶解度不高，穩(wěn)定性低，吸收差，生物利用度低等性質(zhì)而限制了相關(guān)制劑的開發(fā)與臨床應(yīng)用。柚皮素（Naringenin）是柚皮苷的苷元，隸屬于天然的黃酮類化合物。柚皮素在具有黃酮類活性成分多種多樣的藥理活性的同時(shí)，

2、也存在著黃酮類活性成分理化性質(zhì)上的缺陷。本研究著眼于柚皮素新型納米給藥系統(tǒng)的構(gòu)建，以脂質(zhì)體作為藥物傳遞載體，采用薄層分散法制備了柚皮素脂質(zhì)體，以期達(dá)到增加柚皮素的溶解度，提高其口服生物利用度的目的。同時(shí)，針對(duì)柚皮素在體內(nèi)吸收過快的特點(diǎn)，采用麥角固醇（Ergo）對(duì)聚乙二醇（PEG）進(jìn)行修飾，以修飾產(chǎn)物（Ergo–PEG）代替脂質(zhì)體處方中的膽固醇，制備柚皮素長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體，以期延長(zhǎng)藥物在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間，為柚皮素制劑研究提供理論基礎(chǔ)。本論文共分

3、為以下五個(gè)部分：
　　第一章綜述
　　該章主要分為兩個(gè)部分：第一部分根據(jù)納米制劑的分類，對(duì)近年來國(guó)內(nèi)外關(guān)于黃酮類活性成分納米制劑的研究進(jìn)行綜述，包括脂質(zhì)體、聚合物膠束、納米粒、微乳/自微乳、納米混懸液以及納米囊和納米球等；第二部分對(duì)柚皮素的研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述，包括其理化性質(zhì)、藥理活性、制劑研究現(xiàn)狀等，為本課題的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)提供理論支持。
　　第二章柚皮素納米脂質(zhì)體的制備及其體外特性研究
　　本部分實(shí)驗(yàn)首先建立了高效液

4、相色譜法測(cè)定體外樣品中柚皮素含量的分析方法，并考察了柚皮素在不同 pH介質(zhì)（1.2、4.5、6.8）和水中的平衡溶解度，結(jié)果顯示，柚皮素在水中的平衡溶解度僅為37.64±0.66μg·mL-1，說明柚皮素為難溶性藥物。
　　隨后，采用薄層分散法制備了柚皮素載藥脂質(zhì)體，以包封率、載藥量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，利用單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)柚皮素脂質(zhì)體的處方進(jìn)行了優(yōu)化，柚皮素脂質(zhì)體的最優(yōu)處方為：磷脂和膽固醇的總量為350 mg，磷脂和膽固醇的比例

5、為6:1，膽酸鈉和肉豆蔻酸異丙酯（IPM）的量分別為200 mg和150 mg，柚皮素投藥量為20 mg，水化介質(zhì)為5 mL pH7.4的PBS溶液。所制得的柚皮素脂質(zhì)體的包封率可達(dá)到72.2％，載藥量為2.44%。對(duì)最優(yōu)處方制備的柚皮素脂質(zhì)體進(jìn)行體外特性研究發(fā)現(xiàn)，所制備的脂質(zhì)體粒徑為70.53±1.3 nm，多分散性指數(shù)為0.259±0.078，粒徑分布結(jié)果與透射電鏡觀察到的粒子形態(tài)結(jié)果保持一致。Zeta電位為-37.4±3.2 mV

6、，初步穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明柚皮素脂質(zhì)體穩(wěn)定性較好。此外，體外釋藥結(jié)果表明柚皮素脂質(zhì)體可以顯著提高柚皮素在不同介質(zhì)中的釋放速度，說明柚皮素脂質(zhì)體能夠達(dá)到增加柚皮素溶解度的目的。
　　第三章柚皮素PEG化長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的制備及其體外特性研究
　　以麥角固醇（Ergo）和聚乙二醇（PEG）為原料合成了Ergo-PEG，并以其代替原處方中的膽固醇，制備柚皮素 PEG化長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體，以期延長(zhǎng)藥物在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間，從而可以更好的發(fā)揮藥效。采

7、用單因素實(shí)驗(yàn)與正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)柚皮素載藥長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的處方進(jìn)行優(yōu)化，最優(yōu)處方為：磷脂與Ergo-PEG的總含量為400 mg；磷脂與Ergo-PEG的質(zhì)量比為1:1；膽酸鈉與IPM的質(zhì)量均為200 mg；投藥量與磷脂的質(zhì)量比為1:10；水化介質(zhì)為10 mL pH7.4的PBS溶液。該處方所制備的脂質(zhì)體包封率高達(dá)95.67%，相比于普通脂質(zhì)體，包封率顯著提高。
　　對(duì)按照最優(yōu)處方制備的柚皮素長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的粒徑、電位、形態(tài)、穩(wěn)定性和體外

8、釋藥等體外特性進(jìn)行研究。結(jié)果顯示，最優(yōu)處方制備的柚皮素長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的平均粒徑為168.57±3.8 nm，多分散性指數(shù)為0.187±0.048， Zeta電位為-33.5±4.1 mV。初步穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體具有良好的穩(wěn)定性。體外釋藥的結(jié)果顯示，72 h內(nèi)，長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體在三種介質(zhì)中的累計(jì)釋藥率均超過90%，說明長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體增加柚皮素溶解度的效果更好。
　　第四章柚皮素及其脂質(zhì)體大鼠體內(nèi)分析方法的建立
　　本章建立

9、了高效液相色譜法測(cè)定大鼠血漿中柚皮素含量的體內(nèi)分析方法，以沉淀蛋白法和酶解法分別處理血漿樣品后，分別測(cè)定血漿中游離柚皮素的含量（C）和血漿中柚皮素總含量（C'）。液相條件為：流動(dòng)相30%乙腈磷酸二氫鉀緩沖溶液＝30:70（以磷酸調(diào)pH至1.2），色譜柱Symmetry C18柱，檢測(cè)波長(zhǎng)288nm，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量20μL，流速1.0 mL?min-1。在此液相條件下，對(duì)體內(nèi)分析方法進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證，結(jié)果顯示該方法專屬性強(qiáng)，精密度高

10、，回收率高，穩(wěn)定性好，適用于大鼠血漿中柚皮素含量的測(cè)定。
　　第五章柚皮素及其脂質(zhì)體大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究
　　以90 mg·kg-1的劑量對(duì)SD大鼠進(jìn)行口服灌胃等量的柚皮素混懸液、柚皮素納米脂質(zhì)體和柚皮素 PEG化長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體以考察其在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特性。結(jié)果顯示，口服給藥柚皮素和兩種脂質(zhì)體制劑后，Tmax分別為0.25 h、0.25h和0.25 h(未結(jié)合藥物)，0.083 h、0.25 h和0.25 h(總藥物)，說明柚

11、皮素在體內(nèi)可以被快速的吸收而達(dá)到最大的血藥濃度。與柚皮素原料藥相比，柚皮素納米脂質(zhì)體和柚皮素PEG化長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體給藥后大鼠體內(nèi)未結(jié)合藥物的相對(duì)生物利用度分別為688.80%和1187.88%，柚皮素總藥物的相對(duì)生物利用度分別為1343.99%和2090.83%，表明柚皮素脂質(zhì)體可顯著提高柚皮素的體內(nèi)生物利用度，而且與納米脂質(zhì)體相比，PEG化長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的效果更佳。
　　對(duì)比柚皮素納米脂質(zhì)體和柚皮素PEG化長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體，體內(nèi)未結(jié)合藥

12、物的MRT值由9.49±0.44 h增至14.58±0.99 h，t1/2由7.51±0.55 h延長(zhǎng)為13.18±1.02 h；體內(nèi)柚皮素總濃度的MRT′分別為值由9.34±0.50 h增長(zhǎng)為15.35±1.17 h，t′1/2由7.51±0.55 h延長(zhǎng)為13.18±1.02 h，且柚皮素PEG化長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的藥時(shí)曲線下面積AUC′0-48值更大，說明與納米脂質(zhì)體相比，柚皮素PEG化長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體在提高生物利用度的同時(shí)，可明顯延長(zhǎng)藥物