曲酸脂質(zhì)體、囊泡的制備及體外透皮特性研究.pdf

1、第一部分：建立曲酸脂質(zhì)體和囊泡包封率的測(cè)定方法
　　目的：建立曲酸 HPLC測(cè)定方法，建立曲酸脂質(zhì)體、囊泡的包封率測(cè)定方法。
　　方法：
　　1.建立高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定曲酸的含量，對(duì)液相條件的穩(wěn)定性、重復(fù)性、精密度等進(jìn)行考察。
　　2.采用微柱離心法測(cè)定曲酸脂質(zhì)體包封率（Entrapment efficiency， EE），確定離心條件，考察該方法的穩(wěn)定性與重復(fù)性。
　　3.采用超速離心法測(cè)定曲

2、酸非離子表面活性劑囊泡包封率，考察其重復(fù)性。
　　結(jié)果：
　　1.建立了測(cè)定曲酸含量的HPLC方法，方法準(zhǔn)確可靠，可用于計(jì)算包封率。
　　2.建立的微柱離心法可有效分離游離的曲酸和脂質(zhì)體，方法精確度高，重現(xiàn)性好，在選定的柱高和離心條件下，脂質(zhì)體的回收率能夠滿足包封率測(cè)定的要求。
　　3.建立的超速離心法可有效分離游離的曲酸和囊泡，方法重現(xiàn)性滿足包封率測(cè)定的要求。
　　第二部分：曲酸脂質(zhì)體制備工藝及處方優(yōu)化<

3、br>　　目的：確定曲酸脂質(zhì)體的最優(yōu)制備工藝與處方。
　　方法：
　　1.分別采用薄膜分散法、逆相蒸發(fā)法、醋酸鈣梯度法、硫酸銨梯度法制備 KA-L，以包封率為指標(biāo)，選擇最優(yōu)的制備方法進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)。
　　2.采取單因素實(shí)驗(yàn)，對(duì)制備工藝、處方中的各個(gè)因素不同水平下的包封率進(jìn)行考察，從中篩選出3個(gè)因素用于星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面優(yōu)化法，以包封率與載藥量（Drug loading efficiency，DL）為指標(biāo)，將二者統(tǒng)一為總評(píng)

4、歸一值（OD），采用多元非線性模型擬合，根據(jù) OD的大小確定出最優(yōu)的曲酸脂質(zhì)體制備工藝、處方，預(yù)測(cè)最優(yōu)的包封率與載藥量，并對(duì)最佳制備方法進(jìn)行驗(yàn)證。
　　結(jié)果：
　　1.采用薄膜分散法、逆相蒸發(fā)法、醋酸鈣梯度法、硫酸銨梯度法四種方法制備曲酸脂質(zhì)體結(jié)果顯示，醋酸鈣梯度法制備的包封率最高。
　　2.通過對(duì)曲酸脂質(zhì)體處方和制備工藝的單因素考察，確定星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法考察的3個(gè)因素分別為：曲酸/磷脂（m/m，X1）、膽固醇/磷脂

5、（m/m，X2）、醋酸鈣濃度（mol·L-1，X3）。通過繪制等高線圖和效應(yīng)面圖，確定最優(yōu)處方 X1=0.09、X2=0.125、X3=0.15mol·L-1，通過擬合方程計(jì)算得到預(yù)測(cè)包封率為40.645％，載藥量為3.078%，而實(shí)際測(cè)得包封率為：（41.19±1.071）%，載藥量為：（3.064±0.029）%，與預(yù)測(cè)值偏差分別為：1.341%和-0.877%。
　　第三部分：曲酸囊泡制備工藝及處方優(yōu)化
　　目的：確定

6、曲酸囊泡的最優(yōu)制備工藝與處方。
　　方法：
　　1.分別采用薄膜分散法、逆相蒸發(fā)法制備曲酸囊泡，以包封率為指標(biāo)，選擇最優(yōu)的制備方法進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)。
　　2.采用單因素實(shí)驗(yàn)，對(duì)制備工藝、處方中的各個(gè)因素不同水平下的包封率進(jìn)行考察，從中篩選3個(gè)因素用于星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面優(yōu)化法，以包封率與載藥量為指標(biāo)，將二者統(tǒng)一為總評(píng)歸一值（OD），對(duì)結(jié)果采用多元非線性模型擬合，根據(jù) OD值的大小確定最優(yōu)曲酸囊泡制備工藝、處方，預(yù)測(cè)最優(yōu)包封率

7、與載藥量，并對(duì)最佳制備方法進(jìn)行驗(yàn)證。
　　結(jié)果：
　　1.薄膜分散法、逆相蒸發(fā)法制備曲酸囊泡的結(jié)果顯示，逆相蒸發(fā)法制備的曲酸囊泡的包封率最高。
　　2.通過對(duì)曲酸囊泡處方和制備工藝的單因素考察，確定了星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法考察的3個(gè)因素分別為：曲酸投藥量（mg，X1），膽固醇的用量（mg，X2）、司盤40的用量（mg，X3）。通過繪制等高線圖和效應(yīng)面圖，確定最優(yōu)處方 X1=0.045，X2=0.20，X3=0.26，通過擬

8、合方程計(jì)算得到預(yù)測(cè)包封率為39.32%，載藥量為3.66%，而實(shí)際測(cè)得包封率為：（38.95±0.871）%，載藥量為：（3.60±0.025）%，與預(yù)測(cè)值偏差分別為：-0.940%和-1.630%。
　　第四部分：曲酸脂質(zhì)體及囊泡的體外透皮特性研究
　　目的：考察曲酸脂質(zhì)體、囊泡的體外經(jīng)皮滲透特性，并與曲酸溶液進(jìn)行比較。
　　方法：制備最優(yōu)處方的KA-L和 KA-N，確定合適的接收介質(zhì)。利用改良 Franz透皮吸收擴(kuò)

9、散儀對(duì)曲酸溶液（KA-S）、KA-L、KA-N三種制劑的體外透皮特性進(jìn)行考察，分別記錄三種劑型的每小時(shí)透皮量，繪制累積透皮百分率-時(shí)間曲線，并計(jì)算24h累積透過量與皮膚滯留量，對(duì)釋放數(shù)據(jù)進(jìn)行模型擬合，采用滯留時(shí)間法評(píng)價(jià) KA-S、KA-L、KA-N的體外滲透特性，探究KA-S、KA-L、KA-N的體外透皮機(jī)制。
　　結(jié)果：體外透皮結(jié)果顯示，曲酸溶液（KA-S）24h的單位面積累積滲透量最大，為2.862 mg·cm-2，24h累積

10、釋放率已經(jīng)達(dá)到90%，24h單位面積皮膚滯留量為0.233 mg·cm-2；KA-L的24h的單位面積累積滲透量較KA-S的少，為1.722 mg·cm-2，24h累積釋放率為54%，24h單位面積皮膚滯留量為0.746 mg·cm-2；KA-N的24h的單位面積累積滲透量為2.041 mg·cm-2，24h累積釋放率為71%，24h單位面積皮膚滯留量為0.534 mg·cm-2。體外經(jīng)皮滲透曲線基本符合 Higuchi方程，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯

11、示KA-L和KA-N相對(duì)于KA-S的24h透皮速率常數(shù)較小，表明KA-L和KA-N能夠起到較好的緩釋作用，其中KA-L的緩釋效果最好，同時(shí)KA-L和KA-N的24h皮膚滯留量相對(duì)于KA-S較大，表明兩種制劑可以使曲酸更多地滯留于皮下組織中。
　　第五部分：曲酸脂質(zhì)體、囊泡穩(wěn)定性的初步考察
　　目的：初步考察曲酸脂質(zhì)體、囊泡的穩(wěn)定性。
　　方法：進(jìn)行影響因素實(shí)驗(yàn)和長(zhǎng)期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，觀察曲酸脂質(zhì)體和曲酸囊泡在不同溫度與光照條

12、件下的外觀改變，同時(shí)測(cè)定泄漏率，初步考察曲酸脂質(zhì)體、囊泡的穩(wěn)定性。
　　結(jié)果：影響因素實(shí)驗(yàn)和長(zhǎng)期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明溫度與光照對(duì)脂質(zhì)體和囊泡的泄漏率有一定的影響，光照對(duì)脂質(zhì)體的外觀產(chǎn)生一定影響，而長(zhǎng)時(shí)間的貯存則會(huì)加劇曲酸脂質(zhì)體和囊泡的泄漏。
　　結(jié)論：建立的HPLC法可準(zhǔn)確測(cè)定曲酸的含量，確立的微柱離心法和超速離心法能準(zhǔn)確測(cè)定曲酸脂質(zhì)體和囊泡的包封率。經(jīng)單因素實(shí)驗(yàn)與星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法優(yōu)選確定出的曲酸脂質(zhì)體和囊泡的最優(yōu)處方、工藝