尼古丁對內(nèi)皮細(xì)胞纖溶損害的機(jī)制及辛伐他汀的干預(yù)作用.pdf

1、研究背景
　　 吸煙是心血管疾病發(fā)生發(fā)展的一個獨(dú)立而重要的危險因素。吸煙可以損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙，引起體內(nèi)纖溶系統(tǒng)的異常變化，從而增加血栓形成的風(fēng)險。
　　 眾所周知，血液的纖溶能力主要取決于組織型纖溶酶原激活劑（t-PA）及其快速抑制劑纖溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）的活性。大量文獻(xiàn)表明，糖尿病、冠心病可伴發(fā)纖溶功能異常，而有關(guān)吸煙引起的纖溶變化研究尚少。尼古丁是煙草的主要致病成分之一，其通過損

2、傷內(nèi)皮細(xì)胞導(dǎo)致血液纖溶功能下降，但該作用的具體機(jī)制尚不十分清楚。蛋白激酶C（PKC）為細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要遞質(zhì)，廣泛參與細(xì)胞的分泌、增殖、分化等功能，其作用日益受到關(guān)注。目前，尼古丁所致內(nèi)皮細(xì)胞纖溶功能下降與PKC通道的關(guān)系研究較少，且結(jié)論不一。辛伐他汀為臨床常用的血脂調(diào)節(jié)劑，研究表明該藥還具有內(nèi)皮保護(hù)、抗炎、促進(jìn)纖溶等作用。辛伐他汀是否對尼古丁介導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞纖溶功能紊亂具有保護(hù)作用及其可能機(jī)制目前尚無報道。
　　 目的

3、
　　 研究尼古丁及不同濃度的PKC 阻斷劑Staurosporine （STS）作用于人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）后其t-PA、PAI-1蛋白及mRNA表達(dá)的變化，探討尼古丁對HUVECs 纖溶影響的可能機(jī)制；采用不同濃度的辛伐他汀預(yù)處理內(nèi)皮細(xì)胞，了解該藥對尼古丁介導(dǎo)的HUVECs表達(dá) t-PA、PAI-1蛋白及mRNA的影響。
　　 方法
　　 1．實驗分組 HUVECs株培養(yǎng)后接種于25c m25c m

4、的培養(yǎng)瓶中，隨機(jī)分為①對照組：
　　 培養(yǎng)液中加入與尼古丁相同體積的無菌PBS 液；②尼古丁組：培養(yǎng)液中加入終濃度為mol/ L的尼古?。虎跾TS 干預(yù)組：培養(yǎng)液中分別加入終濃度為20、50、mol/ L的STS 預(yù)處理細(xì)胞30min，再加入mol/ L的尼古丁共同培養(yǎng)；④辛伐他汀干預(yù)組：培養(yǎng)液中分別加入終濃度為1、10、mol/ L的辛伐他汀預(yù)處理細(xì)胞2h，再加入mol/ L的尼古丁共同培養(yǎng)。
　　 2．檢測方法同步培

5、養(yǎng)24h后收集各組的細(xì)胞及上清液，采用酶聯(lián)免疫吸附雙抗體夾心法（ELISA）測定各組細(xì)胞上清液中t-PA、PAI-1蛋白濃度，逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)法（RT-PCR）檢測各組細(xì)胞中t-PA和PAI-1mRNA的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果
　　 1．尼古丁組PAI-1mRNA及蛋白含量〔0.9690.112，（66.0512.890）ng/ ml 〕與對照組〔0.0990.013，（38.660±1.749）ng/ ml 〕比較

6、顯著升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P0.01）。尼古丁組t-PA mRNA的表達(dá)（0.0990.011）與對照組（1.0110.132）比較明顯下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.01）；尼古丁組t-PA蛋白（0.7250.211）ng/ ml表達(dá)與對照組（1.0820.131）ng/ ml 比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　 2．STS 干預(yù)結(jié)果各濃度STS 干預(yù)組PAI-1mRNA及蛋白〔0.5880.077，（61.9

7、225.821）ng/ ml 〕、〔0.5300.070，（57.9768.009）ng/ ml 〕、〔0.2220.029，（43.2911.878）ng/ ml 〕均較尼古丁組降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P0.01）；各STS 干預(yù)組PAI-1mRNA及蛋白高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P0.01）。Mol/ LSTS組t-PA mRNA（0.1840.023）與尼古丁組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），50、100μmo

8、l/ L STS組t-PA mRNA （0.2930.037，0.4120.053）較尼古丁組升高，但仍低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P0.01）；各組t-PA蛋白與對照組及尼古丁組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P>0.05）。
　　 3．辛伐他汀干預(yù)結(jié)果各濃度辛伐他汀干預(yù)組PAI-1mRNA及蛋白〔0.5810.095，（60.7882.500）ng/ ml 〕、〔0.5110.084，（54.9553.971）ng/ ml

9、 〕、〔0.02190.037，（41.9244.472）ng/ ml 〕均較尼古丁組降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P0.01），以mol/ L 辛伐他汀組降低最為顯著，與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。Mol/ L辛伐他汀組t-PA mRNA （0.1870.025）與尼古丁組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；10、100μmol/ L 辛伐他汀組t-PA mRNA （0.2780.038）、（0.3320.046）較