高眼壓大鼠外周血內(nèi)皮祖細胞數(shù)量變化及辛伐他汀干預(yù)作用.pdf

1、目的：
　　1.建立大鼠高眼壓模型，研究高眼壓大鼠視網(wǎng)膜細胞凋亡隨病程發(fā)展的變化情況。
　　2.研究高眼壓大鼠外周血內(nèi)皮祖細胞(endothelialprogenitorcells，EPCs)數(shù)量隨病程發(fā)展變化。
　　3.探討高眼壓大鼠辛伐他汀干預(yù)對視網(wǎng)膜細胞凋亡及外周血EPCs的影響，探討其對視網(wǎng)膜改善作用，為高眼壓視神經(jīng)保護提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.3月齡雄性Wistar大鼠，體重220～25

2、0g，共150只，隨機分為①正常對照組20只，②高眼壓組100只，③激光組30只。高眼壓組大鼠采用光凝角鞏膜緣靜脈及鞏膜上靜脈方法建立大鼠高眼壓模型，根據(jù)其病程不同將其分為5個亞組，即高眼壓3天、7天、3周、2月、3月組。激光組大鼠采用光凝靜脈外側(cè)，避免光凝血管壁建立大鼠激光組模型。根據(jù)激光干預(yù)后時間長短分為3個亞組，即激光3天、7天、3周組。測定5個亞組及激光組3個亞組大鼠外周血EPCs數(shù)量。HE染色觀察高眼壓組大鼠視網(wǎng)膜各層結(jié)構(gòu)，末

3、端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測視網(wǎng)膜凋亡細胞，免疫組織化學(xué)法測定視網(wǎng)膜Bc1-2/Bax水平。
　　2.高眼壓組大鼠100只，隨機選取30只，予辛伐他汀以20mg/kg每日灌胃給藥，連續(xù)灌21日作為干預(yù)組，予20只生理鹽水灌胃作為空白對照組，余50只高眼壓大鼠不服用任何藥物，作為高眼壓陽性對照組。干預(yù)組根據(jù)其病程長短分別分為3個亞組，即干預(yù)組3天、7天、3周組。測定3個亞組外周血EPCs數(shù)量。H

4、E染色觀察干預(yù)組3周組大鼠視網(wǎng)膜各層結(jié)構(gòu)，以TUNEL法檢測視網(wǎng)膜凋亡細胞，免疫組織化學(xué)法測定視網(wǎng)膜Bc1-2/Bax水平。
　　結(jié)果：
　　1.眼壓3天時達到高峰，后逐漸緩慢下降，但仍高于正常8mmHg以上，維持3月以上。激光組3天也達高峰，后緩慢下降。外周血EPCs數(shù)量3天達高峰，后緩慢降低，高眼壓組比激光組下降更明顯(p<0.05)。
　　2.高眼壓大鼠視網(wǎng)膜HE染色和正常對照組相比，高眼壓3天、7天、3周各亞組

5、大鼠視網(wǎng)膜形態(tài)未見明顯差異；高眼壓2月時，視網(wǎng)膜各層明顯變薄以外核層最為顯著，神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)量顯著減少；高眼壓3個月時可見視網(wǎng)膜變薄進一步加重，外核層更薄，神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)量更少，排列更加紊亂。
　　3.免疫組化高眼壓大鼠Bc1-2/Bax陽性細胞比例和正常對照組相比，Bc1-2陽性細胞高眼壓3天、7天、3周亞組未見明顯差異(p>0.05)，高眼壓2月、3月亞組陽性細胞比例明顯增高(p<0.05)；Bax陽性細胞高眼壓3天、7天亞組未見

6、明顯差異(p>0.05)，高眼壓3周、2月、3月亞組陽性細胞比例明顯增高(p<0.05)。高眼壓大鼠TUNEL陽性細胞比例隨病程逐漸增高。
　　4.干預(yù)組大鼠與高眼壓組相比，眼壓未見明顯差異(p>0.05)。外周血EPCs數(shù)量3天達高峰，后緩慢降低，3天時高于高眼壓組(p<0.05)，3周時也高于高眼壓組(p<0.05)。HE染色視網(wǎng)膜各層形態(tài)稍整齊；Bc1-2陽性細胞數(shù)未見明顯差異(p>0.05)。Bax陽性細胞比例降低，TUN

7、EL陽性細胞比例明顯降低。
　　結(jié)論：
　　1.通過光凝角鞏膜緣靜脈及鞏膜上靜脈方法可成功建立大鼠高眼壓模型，高眼壓早期外周血EPCs數(shù)量達高峰，后緩慢降低。外周血EPCs數(shù)量高眼壓與激光組早期相比有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　2.隨高眼壓病程延長視網(wǎng)膜感光細胞凋亡數(shù)量逐漸增多，神經(jīng)節(jié)細胞明顯減少。
　　3.辛伐他汀干預(yù)可以提高高眼壓早期外周血EPCs數(shù)量，使凋亡細胞數(shù)量減少，神經(jīng)節(jié)細胞剩余數(shù)量增多，可能對模型大鼠視網(wǎng)膜各