急性肺栓塞大鼠細(xì)胞因子的變化及尿激酶的干預(yù)作用.pdf

1、研究背景:
　　肺血栓栓塞癥(PTE)是內(nèi)源性或外源性血栓栓子堵塞肺動脈所引起肺循環(huán)障礙的臨床和病理生理綜合征。PTE發(fā)病率、病死率和致殘率高，是繼惡性腫瘤、心肌梗死之后第三大死亡原因和婦女產(chǎn)后首位死亡原因，已成為國際性醫(yī)療保健問題。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，未治療的肺栓塞死亡率高達(dá)30％，且其PTE漏誤診率極高，歐美國家高達(dá)70％，國內(nèi)則約在90％左右。由于大部分患者得不到及時(shí)治療，急性肺血栓栓塞后大多數(shù)患者在解剖、血流動力學(xué)方面不能完全恢復(fù)

2、正常，另有少數(shù)患者發(fā)展為預(yù)后不良的慢性血栓栓塞性肺動脈高壓(CTEPH)。上述情況均伴有肺血管重構(gòu)，即小的肌型肺動脈中膜增厚和/或非肌型動脈肌型化;其機(jī)制主要是在細(xì)胞因子作用下，血管平滑肌細(xì)胞(SMC)遷移至肺動脈內(nèi)膜并增殖所致。低分子肝素(LMWH)和尿激酶(UK)均具有抗SMC增殖作用，目前關(guān)于LMWH和UK對急性PTE后肺動脈內(nèi)膜增生作用機(jī)制的研究極少。
　　目的:
　　1.觀察急性肺栓塞后內(nèi)皮素-1、基質(zhì)金屬蛋白酶-

3、9的變化及不同表達(dá)，探討它們對肺動脈內(nèi)膜增生的影響機(jī)制，并研究其與PTE程度和抗凝溶栓治療的相關(guān)性。
　　2.觀察LMWH和UK在急性肺血栓栓塞癥后肺動脈新生內(nèi)膜形成中的作用機(jī)制，并進(jìn)行對比性研究。
　　方法:
　　1.雄性SD大鼠124只，隨機(jī)分為假手術(shù)組（Sham組）、肺栓塞組(PTE組)、尿激酶組組(UK組)和低分子肝素組（LMWH組）各30只。制作急性肺栓塞模型過程中死亡4只。鼠尾靜脈取血，制備自體血栓;頸靜脈

4、插管注入自體血栓栓子制成急性PTE模型。Sham組注入等量生理鹽水作對照。LMWH組于PTE模型制成后開始皮下注射LMWH（速碧林，0.01ml/Kg），Q12h，連續(xù)7天。UK組于模型制成后開始靜脈滴注尿激酶(20000IU/Kg)，繼以LMWH（速碧林，0.01ml/Kg）皮下注射，Q12h，至7天。Sham組及PTE組皮下注射等量生理鹽水，時(shí)間同LMWH組。每組分別于栓塞后2h、4h、6h、第1、4、7天各處死5只。
　　2

5、.右心導(dǎo)管法測定肺動脈平均壓(mPAP)、右心室壓力(RVP)。
　　3.右頸動脈插管取血分別進(jìn)行血?dú)夥治?、ET-1、MMP-9水平的測定。
　　4.肺組織切片HE染色觀察PTE后肺組織病理學(xué)特點(diǎn)及肺動脈內(nèi)膜增生情況。
　　5.采用免疫組織化學(xué)方法檢測ET-1、MMP-9表達(dá)。
　　6.Western blot方法檢測肺組織MMP-9的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.共94只大鼠注入栓子，術(shù)后1小時(shí)內(nèi)死亡

6、3只，術(shù)后2小時(shí)內(nèi)死亡1只，2小時(shí)后無死亡。所有大鼠注入栓子后均出現(xiàn)呼吸急促、紫紺、心率加快。制成急性PTE模型共90只，成功率95.7％。
　　2.栓塞后PTE、LMWH及UK組mPAP均明顯升高。PTE組h2、h4、h6、d1、d4時(shí)間點(diǎn)mPAP均升高，與Sham組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。LMwH組h2、h4、h6、d1時(shí)間點(diǎn)mPAP與Sham組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);與PTE組比較d4時(shí)間點(diǎn)差異有

7、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。UK組mPAPh2、h4、h6與Sham組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);與PTE組比較h6、d1、d4有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);與LMWH組比較h6、d1差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　3.栓塞后PTE、LMWH及UK組RVP均明顯升高。PTE、LMwH組h2、h4、h6、d1時(shí)間點(diǎn)RVP均升高與Sham組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。UK組RVPh2與Sham組比較差異有統(tǒng)

8、計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);UK組與PTE組、LMWH組比較，h6、d1時(shí)間點(diǎn)RVP差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　4.PTE組所有時(shí)間點(diǎn)PaO2均降低與Sham組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。LMWH組h2、h4、h6、d1、d4PaO2降低與sham組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);與PTE組比較d1、d7差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。UK組PaO2h2、h4、h6、d1與Sham組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

9、(p＜0.05);與PTE組比較h6、d1、d4、d7差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);與LMWH組比較h6、d1、d4差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。四組各時(shí)間點(diǎn)PaCO2比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5.栓塞后PTE、LMWH及UK組ET-1值均明顯升高。PTE、LMWH組h2、h4、h6時(shí)間點(diǎn)ET-1值升高與Sham組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。LMWH組在d4、d7ET-1值明顯降低與Sham組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)

10、意義(p＜0.05)。UK組h2、h4、h6ET-1值升高與Sham組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);與PTE組比較h4、h6、d7差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);與LMWH組比較h4、h6差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　6.栓塞后PTE、LMWH及UK組MMP-9值均明顯升高。PTE組所有時(shí)間點(diǎn)MMP-9值與Sham組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。LMWH、UK組h2、h4、h6、d1MMP-9值與Sham組比

11、較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。LMWH組與PTE組比較d4、d7MMP-9值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。UK組與PTE組比較d1、d4、d7MMP-9值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　7.免疫組化結(jié)果顯示:ET-1主要由肺血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、新生內(nèi)膜中平滑肌細(xì)胞、肺泡和支氣管上皮細(xì)胞等表達(dá)。PTE組ET-1呈強(qiáng)陽性表達(dá)，LMWH組和UK組均表達(dá)弱陽性。MMP-9主要由肺血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、新生內(nèi)膜

12、中平滑肌細(xì)胞及浸潤的單核-巨噬細(xì)胞表達(dá)。栓塞后PTE組MMP-9呈強(qiáng)陽性表達(dá)，LMWH組和UK組均呈弱陽性表達(dá)。
　　8.Western blot結(jié)果顯示:PTE、LMWH及UK組MMP-9蛋白表達(dá)較Sham組均增高。PTE組MMP-9蛋白表達(dá)量明顯增高(p＜0.05)。LMWH和UK兩組MMP-9蛋白表達(dá)量較PTE組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)，但較Sham組仍高。
　　結(jié)論:
　　1.經(jīng)頸靜脈注入自體血栓

13、可制成理想的大鼠急性肺栓塞模型。
　　2.大鼠急性PTE后第4天即出現(xiàn)肺動脈內(nèi)膜增生;肺動脈壁炎性細(xì)胞浸潤，中膜平滑肌細(xì)胞向內(nèi)膜遷移、增生是急性PTE后肺動脈內(nèi)膜增生的主要機(jī)制;ET-1、MMP-9在大鼠急性PTE后肺動脈內(nèi)膜增生、肺血管重構(gòu)過程中起著重要作用。
　　3.LMWH和UK可以減輕大鼠急性PTE后肺動脈內(nèi)膜增生;還可以降低ET-1、MMP-9血漿中的水平及其在肺動脈中的蛋白合成;UK與LMWH比較，可以更加迅速地